[發(fā)明專利]一種利用包含分裂適配體的納米簇信標(biāo)型熒光傳感器檢測(cè)目標(biāo)物的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010512037.8
• 申請(qǐng)日: 2020-06-08
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111650167B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-12-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張幸;李昺之;陳月;林蕾;夏安琪;張世林;鎖緹瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種利用包含分裂適配體的納米簇信標(biāo)型熒光傳感器檢測(cè)目標(biāo)物的方法，其特征在于：該方法具體包括如下步驟：

a)制備DNA-銀納米簇信標(biāo)AgNCs-Apt1：將目標(biāo)物分子的納米簇信標(biāo)模板即分裂適配體1Apt1溶解于Tris-HCl緩沖液中，加熱至90-95℃，維持5-15min后迅速轉(zhuǎn)移至冰水浴中，隨后加入硝酸銀溶液，渦旋混合后避光20-25℃下反應(yīng)20-40min，接著，迅速加入硼氫化鈉溶液，充分振搖混合過(guò)夜；所述目標(biāo)物分子為腺苷、可卡因、17β-雌二醇、凝血酶中的一種；

b)將1體積的AgNCs-Apt1溶液、1體積的富含鳥(niǎo)嘌呤增強(qiáng)子序列的分裂適配體2GRS-Apt2溶液、2體積含有不同濃度目標(biāo)物的樣品分別與6體積的Tris-HCl緩沖液混合反應(yīng)；

其中，當(dāng)所述目標(biāo)物分子為腺苷時(shí)，AgNCs-Apt1_Ade序列從5’到3’為CCCTTAATCCCCACCTGGGGGAGTAT，GRS-Apt2_Ade序列從5’到3’為T(mén)GCGGAGGAAGGTGGGTGGGGTGGGGTGGGG；當(dāng)所述目標(biāo)物分子為凝血酶時(shí)，AgNCs-Apt1_thrombin序列從5’到3’為CCCTTAATCCCCGGTTGGTG，GRS-Apt2_thrombin序列從5’到3’為T(mén)GGTTGGGGGTGGGGTGGGGTGGGG；當(dāng)所述目標(biāo)物分子為可卡因時(shí)，AgNCs-Apt_cocaine序列從5’到3’為CCCTTAATCCCCGTTCTTCAATGAAGTGGGACGACA，GRS-Apt2_cocaine序列從5’到3’為GGGAGTCAAGAACGGGTGGGGTGGGGTGGGG；當(dāng)所述目標(biāo)物分子為17β-雌二醇時(shí)，AgNCs-Apt_{17β-estradiol}序列從5’到3’為CCCTTAATCCCCGCTTCCAGCTTATTGAATTACACGCAGAGGGTA，GRS-Apt2_{17β-estradiol}序列從5’到3’為GCGGCTCTGCGCATTCAATTGCTGCGCGCTGAAGCGCGGAAGCGGGTGGGGTGGGGTGGGG：

c)將步驟b)所得的樣品混合溶液在2000-4000rpm的轉(zhuǎn)速下進(jìn)行離心，接著將其置于20-25℃下孵育，在激發(fā)波長(zhǎng)為550-570nm下，記錄發(fā)射波長(zhǎng)為610-640nm下所得樣品的熒光強(qiáng)度；通過(guò)繪制關(guān)系曲線圖，計(jì)算目標(biāo)物分子的濃度與熒光強(qiáng)度之間的關(guān)系式；

d)將健康志愿者的血清樣品進(jìn)行離心，接著加入Tris-HCl緩沖液將血清樣品稀釋50-100倍后，取10-20μL作為待測(cè)目標(biāo)物樣品進(jìn)行b)、c)步驟操作；

e)將待測(cè)目標(biāo)物樣品在發(fā)射波長(zhǎng)為610-640nm處獲得的熒光強(qiáng)度代入步驟c)獲得的關(guān)系式，計(jì)算出血清樣品中的目標(biāo)物分子濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用包含分裂適配體的納米簇信標(biāo)型熒光傳感器檢測(cè)目標(biāo)物的方法，其特征在于：步驟b)所述的混合條件為在20-25℃下孵育20-40min。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用包含分裂適配體的納米簇信標(biāo)型熒光傳感器檢測(cè)目標(biāo)物的方法，其特征在于：步驟b)所述的含有不同濃度目標(biāo)物的樣品中，腺苷的濃度范圍是0-1600nM，可卡因的濃度范圍是0-2000nM，17β-雌二醇的濃度范圍是0-2000nM，凝血酶的濃度范圍是0-2000nM。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的利用包含分裂適配體的納米簇信標(biāo)型熒光傳感器檢測(cè)目標(biāo)物的方法，其特征在于：步驟c)具體為：分別在激發(fā)波長(zhǎng)為561nm下，測(cè)定所得樣品在627nm處的熒光強(qiáng)度。