[發明專利]一種利用包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物的方法

有效

• 申請號: 202010512037.8
• 申請日: 2020-06-08
• 公開（公告）號: CN111650167B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發明（設計）人: 張幸;李昺之;陳月;林蕾;夏安琪;張世林;鎖緹瑩
• 申請（專利權）人: 南京師范大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 柏尚春

1.一種利用包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物的方法，其特征在于：該方法具體包括如下步驟：

a)制備DNA-銀納米簇信標AgNCs-Apt1：將目標物分子的納米簇信標模板即分裂適配體1Apt1溶解于Tris-HCl緩沖液中，加熱至90-95℃，維持5-15min后迅速轉移至冰水浴中，隨后加入硝酸銀溶液，渦旋混合后避光20-25℃下反應20-40min，接著，迅速加入硼氫化鈉溶液，充分振搖混合過夜；所述目標物分子為腺苷、可卡因、17β-雌二醇、凝血酶中的一種；

b)將1體積的AgNCs-Apt1溶液、1體積的富含鳥嘌呤增強子序列的分裂適配體2GRS-Apt2溶液、2體積含有不同濃度目標物的樣品分別與6體積的Tris-HCl緩沖液混合反應；

其中，當所述目標物分子為腺苷時，AgNCs-Apt1_Ade序列從5’到3’為CCCTTAATCCCCACCTGGGGGAGTAT，GRS-Apt2_Ade序列從5’到3’為TGCGGAGGAAGGTGGGTGGGGTGGGGTGGGG；當所述目標物分子為凝血酶時，AgNCs-Apt1_thrombin序列從5’到3’為CCCTTAATCCCCGGTTGGTG，GRS-Apt2_thrombin序列從5’到3’為TGGTTGGGGGTGGGGTGGGGTGGGG；當所述目標物分子為可卡因時，AgNCs-Apt_cocaine序列從5’到3’為CCCTTAATCCCCGTTCTTCAATGAAGTGGGACGACA，GRS-Apt2_cocaine序列從5’到3’為GGGAGTCAAGAACGGGTGGGGTGGGGTGGGG；當所述目標物分子為17β-雌二醇時，AgNCs-Apt_{17β-estradiol}序列從5’到3’為CCCTTAATCCCCGCTTCCAGCTTATTGAATTACACGCAGAGGGTA，GRS-Apt2_{17β-estradiol}序列從5’到3’為GCGGCTCTGCGCATTCAATTGCTGCGCGCTGAAGCGCGGAAGCGGGTGGGGTGGGGTGGGG：

c)將步驟b)所得的樣品混合溶液在2000-4000rpm的轉速下進行離心，接著將其置于20-25℃下孵育，在激發波長為550-570nm下，記錄發射波長為610-640nm下所得樣品的熒光強度；通過繪制關系曲線圖，計算目標物分子的濃度與熒光強度之間的關系式；

d)將健康志愿者的血清樣品進行離心，接著加入Tris-HCl緩沖液將血清樣品稀釋50-100倍后，取10-20μL作為待測目標物樣品進行b)、c)步驟操作；

e)將待測目標物樣品在發射波長為610-640nm處獲得的熒光強度代入步驟c)獲得的關系式，計算出血清樣品中的目標物分子濃度。

2.根據權利要求1所述的利用包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物的方法，其特征在于：步驟b)所述的混合條件為在20-25℃下孵育20-40min。

3.根據權利要求1所述的利用包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物的方法，其特征在于：步驟b)所述的含有不同濃度目標物的樣品中，腺苷的濃度范圍是0-1600nM，可卡因的濃度范圍是0-2000nM，17β-雌二醇的濃度范圍是0-2000nM，凝血酶的濃度范圍是0-2000nM。

4.根據權利要求1所述的利用包含分裂適配體的納米簇信標型熒光傳感器檢測目標物的方法，其特征在于：步驟c)具體為：分別在激發波長為561nm下，測定所得樣品在627nm處的熒光強度。