[發明專利]一種針對20種人參皂苷的高分辨二級質譜篩查方法

在審

• 申請號: 202010509417.6
• 申請日: 2020-06-05
• 公開（公告）號: CN111896638A
• 公開（公告）日: 2020-11-06
• 發明（設計）人: 韓明;王松;郭英俠;徐德輝;樊杰;隋國奇;閆勝楠
• 申請（專利權）人: 吉林紫鑫藥業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司 22100
• 代理人: 魏征驥

本發明涉及一種針對20種人參皂苷的高分辨二級質譜篩查方法，屬于天然產物檢測技術領域。包括：色譜條件與系統適用性試驗，對照品溶液的制備，供試品溶液的制備，質譜庫的建立，本發明構建了一個人參皂苷質譜數據庫，涵蓋20種人參皂苷在主要人參制品如生曬參、鮮人參、國產紅參、高麗紅參提取物中，在三重四級桿質譜不同能量條件下的質譜數據庫以及高分辨確證方法。可用于樣品篩查過程中的高精準定性分析，實現了無人參皂苷標品的篩查與準確定性，解決了標準品昂貴，到貨周期長以及受出入境管控等影響因素，大大降低日常檢測過程中的檢測成本，同時，降低人參皂苷檢測對操作人員的技術水平要求，使其更易于操作。

技術領域

本發明屬于天然產物檢測技術領域，具體涉及20種人參皂苷的快速篩查方法。

背景技術

人參為五加科(Araliaceae)植物人參的干燥根，是傳統的名貴中藥材，具有大補元氣、復脈固脫、補脾益肺、生津養血、安神益智的功效。一直以來人參均作為藥食同源的藥材廣泛用于藥物、藥膳及食物滋補，在中國已被廣泛應用了幾千年。人參中化學成分包括人參皂苷、糖類、氨基酸、維生素、蛋白質、多肽、有機酸、脂溶性成分以及微量元素等，但人參皂苷是人參中最為重要的一類生理活性物質，具有調節中樞神經系統、改善心血管及造血系統、調節內分泌系統、提高免疫力、抗疲勞以及抗癌等作用。目前，人參中已發現單體皂苷上百種，人參總皂苷和單體皂苷的生理活性研究一直都是活躍的研人參總皂苷和單體皂苷的含量常是評價人參及其產品質量的重要指標。

人參皂甙種類繁多，還有各種異構體，因此對人參皂苷的檢測尋求簡便、快速、準確、且自動化程度高的分析方法和儀器設備，已成為分析工作者研究人參皂苷種類和含量測定的目標。隨著科學技術的發展，各種檢測手段和方法的日益成熟，對人參皂苷類成分的分析檢測方法也日益增多。目前，國內外針對人參皂苷的檢測方法，多采用比色法、液相色譜以及液相色譜-串聯四極桿質譜法進行分析。這些方法各有其優缺點，比色法檢測成本低廉，但只能用于總皂苷檢測，液相色譜法是最主要的檢測技術，但由于液相色譜受到標準品和基質干擾的影響，在分離分析，尤其是針對稀有皂苷的檢測受到很大的限制。隨著質譜技術的發展，尤其是高分辨多級質譜技術的使用能夠更多、更快地發現人參皂甙可能的新成分。本文用LTQ-Orbitrap高分辨組合質譜儀對東北人參提取物進行了液質聯用的5級高分辨質譜分析，得到了近30個人參皂甙成份的母離子和各級碎片離子的精確分子量，質量準確度在1ppm內，由此得到了唯一的分子式。通過和已報道的人參皂甙相比較，可以確定各種皂甙的甙元和糖組成。

發明內容

本發明提供一種針對20種人參皂苷的高分辨二級質譜篩查方法。

本發明采取的技術方案是，包括下列步驟：

(1)、色譜條件與系統適用性試驗

色譜條件：ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱，100mm×2.1mm，1.7μm，樣品管理器溫度15℃，柱溫30℃，進樣體積10μL，流速為0.4mL·min-1，流動相A：0.1％甲酸水溶液，v/v；流動相B：0.1％甲酸乙腈溶液，v/v。梯度洗脫條件：0～1min，5～15％B；1～10min，15～35％B；10～14min，35～42％B；14～24min，42～80％B；24～25min，80～95％B；25～26min，95％B；26～27min，95～5％B；27～29min，5％B。

質譜條件：電噴霧離子化源，ESI，Electron Spray Ionization，負離子檢測模式，全掃掃描范圍為m/z 100～1200，毛細管電壓2.2kV(ESI-)，錐孔氣流量為50L·h-1，錐孔電壓為40V，脫溶劑氮氣流量為600L·h-1，脫溶劑氣溫度300℃，源溫120℃，氬氣流量0.15mL·min-1，采用甲酸鈉溶液對儀器進行校正，采用亮氨酸-腦啡肽[M-H]-554.2615作為Lock Spray校正標準液(100pg·mL-1)，實時校正的流速為15μL·min-1；

(2)、對照品溶液的制備