[發明專利]一種T淋巴細胞凍存液及其制備方法和細胞凍存方法

在審

• 申請號: 202010506576.0
• 申請日: 2020-06-05
• 公開（公告）號: CN111657264A
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發明（設計）人: 崔冬月;劉向陽
• 申請（專利權）人: 廣州佑源生物工程有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 鄭自群

本發明公開了一種T淋巴細胞凍存液及其制備方法和凍存方法。該T淋巴細胞凍存液包括：二甲基亞砜、無血清細胞培養基、血清替代物，其中，所述血清替代物，按重量份數計，包括如下組分：氨基酸、人血清白蛋白、無機鹽、維生素、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、胰島素、丙酮酸鈉、谷胱甘肽。本發明提供的T淋巴細胞凍存液的成分簡單，制備工藝簡單，成本低，易于產業化生產；本發明提供的凍存液不影響細胞的特性和細胞的增殖能力，保持了T淋巴細胞高復蘇活率，能夠較好的保持細胞凍存復蘇后的增殖速度，可以滿足大規模凍存細胞的需求，有助于細胞凍存技術的快速應用和推廣；本發明提供的T淋巴細胞凍存方法具有操作簡單、快速的優勢。

技術領域

本發明涉及細胞生物學技術領域，特別涉及一種T淋巴細胞凍存液及其制備方法和細胞凍存方法。

背景技術

T淋巴細胞來源于骨髓的多能干細胞，成熟的T細胞經血流分布至外周免疫器官的胸腺依賴區定居，并可經淋巴管、外周血和組織液等進行再循環，發揮細胞免疫及免疫調節等功能。目前干細胞和免疫細胞技術廣泛應用，干細胞和免疫細胞儲存是整個細胞產業鏈中的重要環節。而T淋巴細胞細胞凍存需要使用保護劑，防止細胞在凍存和復蘇過程中受到冰晶損傷、脫水和吸水損傷。目前使用較多的凍存液配方是由二甲基亞砜、自體血漿和細胞培養基按照1:4:5的重量比配制而成的，這種凍存液雖然可以維持細胞的增殖速度，但是由于自體血漿取材有限，當大量細胞擴增凍存時，該配方無法滿足細胞凍存所需凍存液體積。

發明內容

本發明目的在于提供一種T淋巴細胞凍存液及其制備方法和細胞凍存方法，以解決上述技術問題。

為了解決上述技術問題，本發明的技術方案為：

第一方面，本發明提供的一種T淋巴細胞凍存液，按重量份數計，包括：二甲基亞砜5～15份、無血清細胞培養基40～60份、血清替代物35～45份，其中，所述血清替代物，按重量份數計，包括如下組分：氨基酸20～80份、人血清白蛋白200～500份、無機鹽50～200份、維生素3～30份、二十二碳六烯酸1～10份、二十碳五烯酸1～10份、胰島素5～20份、丙酮酸鈉40～200份、谷胱甘肽1～2份。

優選的，所述T淋巴細胞凍存液，按重量份數計，包括：二甲基亞砜10份、無血清細胞培養基50份、血清替代物40份。

優選的，所述無血清細胞培養基為ALyS505N-0無血清細胞培養基。

優選的，所述維生素選自維生素D₂、維生素K₂、維生素K₃中的一種或多種。

進一步優選的，所述維生素由維生素D₂、維生素K₂、維生素K₃按照1:1:1的重量比混合而成。

優選的，所述血清替代物，按重量份數計，包括如下組分：氨基酸50～60份、人血清白蛋白300～350份、無機鹽80～120份、維生素9～15份、二十二碳六烯酸3～8份、二十碳五烯酸3～8份、胰島素10～15份、丙酮酸鈉100～150份、谷胱甘肽1～2份。

第二方面，本發明提供的一種如第一方面所述的T淋巴細胞凍存液的制備方法，包括如下步驟：

(1)將氨基酸、人血清白蛋白、無機鹽、維生素D₂、維生素K₂、維生素K₃、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、胰島素、丙酮酸鈉、谷胱甘肽混合制成血清替代物；

(2)將二甲基亞砜、無血清細胞培養基和所得的血清替代物混合制成凍存液。

第三方面，本發明提供的一種T淋巴細胞凍存方法，包括如下步驟：

(1)取如第一方面所述的T淋巴細胞凍存液，