[發(fā)明專利]一種T淋巴細(xì)胞凍存液及其制備方法和細(xì)胞凍存方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010506576.0
• 申請日: 2020-06-05
• 公開（公告）號: CN111657264A
• 公開（公告）日: 2020-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 崔冬月;劉向陽
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州佑源生物工程有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 鄭自群

1.一種T淋巴細(xì)胞凍存液，其特征在于，按重量份數(shù)計，包括：二甲基亞砜5～15份、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基40～60份、血清替代物35～45份，其中，所述血清替代物，按重量份數(shù)計，包括如下組分：氨基酸20～80份、人血清白蛋白200～500份、無機(jī)鹽50～200份、維生素3～30份、二十二碳六烯酸1～10份、二十碳五烯酸1～10份、胰島素5～20份、丙酮酸鈉40～200份、谷胱甘肽1～2份。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的T淋巴細(xì)胞凍存液，其特征在于，所述T淋巴細(xì)胞凍存液，按重量份數(shù)計，包括：二甲基亞砜10份、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基50份、血清替代物40份。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的T淋巴細(xì)胞凍存液，其特征在于，所述無血清細(xì)胞培養(yǎng)基為ALyS505N-0無血清細(xì)胞培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的T淋巴細(xì)胞凍存液，其特征在于，所述維生素選自維生素D₂、維生素K₂、維生素K₃中的一種或多種。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的T淋巴細(xì)胞凍存液，其特征在于，所述維生素由維生素D₂、維生素K₂、維生素K₃按照1:1:1的重量比混合而成。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的T淋巴細(xì)胞凍存液，其特征在于，所述血清替代物，按重量份數(shù)計，包括如下組分：氨基酸50～60份、人血清白蛋白300～350份、無機(jī)鹽80～120份、維生素9～15份、二十二碳六烯酸3～8份、二十碳五烯酸3～8份、胰島素10～15份、丙酮酸鈉100～150份、谷胱甘肽1～2份。

7.一種如權(quán)利要求1～6中任一項所述的T淋巴細(xì)胞凍存液的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將氨基酸、人血清白蛋白、無機(jī)鹽、維生素D₂、維生素K₂、維生素K₃、二十二碳六烯酸、二十碳五烯酸、胰島素、丙酮酸鈉、谷胱甘肽混合制成血清替代物；

(2)將二甲基亞砜、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基和所得的血清替代物混合制成凍存液。

8.一種T淋巴細(xì)胞凍存方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)取如權(quán)利要求1～6中任一項所述的T淋巴細(xì)胞凍存液；

(2)從培養(yǎng)瓶中取出T淋巴細(xì)胞懸液，采用血球技術(shù)板進(jìn)行計數(shù)，將細(xì)胞懸液離心，棄去上清后，加入所述T淋巴細(xì)胞凍存液中，再轉(zhuǎn)移至凍存管；

(3)將凍存管放入程序降溫儀中，降溫后凍存；

(4)將凍存后轉(zhuǎn)移至液氮罐內(nèi)存放。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的T淋巴細(xì)胞凍存方法，其特征在于，所述步驟(2)中離心的轉(zhuǎn)速為1000～2000r/min，時間為3～10min。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的T淋巴細(xì)胞凍存方法，其特征在于，所述步驟(2)中凍存管中T淋巴細(xì)胞的濃度為0.5～2×10⁸個/mL。