[發(fā)明專(zhuān)利]一種人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010501359.2
• 申請(qǐng)日: 2020-06-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111662866B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張印
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 愛(ài)存細(xì)胞生物科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/0775
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 廣州天河萬(wàn)研知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 44418
• 代理人: 劉強(qiáng);陳軒

本發(fā)明屬于干細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。本發(fā)明提供的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括高級(jí)RPMI?1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基，細(xì)胞生長(zhǎng)因子，Ultroser G血清替代物，L?谷氨酰胺及金銀花粉。本發(fā)明提供的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，可以促進(jìn)細(xì)胞分裂，在一定時(shí)間內(nèi)，培養(yǎng)更多的細(xì)胞，且不加入血清，減少了血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用及血清源性污染。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于干細(xì)胞培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。

背景技術(shù)

干細(xì)胞，即為起源細(xì)胞。簡(jiǎn)單來(lái)講，它是一類(lèi)具有多向分化潛能和自我復(fù)制能力的原始的未分化細(xì)胞，是形成哺乳類(lèi)動(dòng)物的各組織器官的原始細(xì)胞。干細(xì)胞在形態(tài)上具有共性，通常呈圓形或橢圓形，細(xì)胞體積小，核相對(duì)較大，細(xì)胞核多為常染色質(zhì)，具有較高的端粒酶活性。

而人的羊膜位于胎盤(pán)的最內(nèi)側(cè)，主要由于外胚層的上皮細(xì)胞和位于中胚層的間充質(zhì)細(xì)胞構(gòu)成，其不含血管，細(xì)胞成分相對(duì)簡(jiǎn)單，在胎兒娩出后即成為廢棄物，而人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞有著豐富、無(wú)需有創(chuàng)操作、取材幾乎不受限制，分離培養(yǎng)方法簡(jiǎn)便、有向3個(gè)胚層的組織細(xì)胞分化的潛能，免疫原性低等多種優(yōu)點(diǎn)，有望成為一種更加理想的間充質(zhì)干細(xì)胞以用于臨床研究及應(yīng)用。因此，培養(yǎng)更多的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞是十分有必要的。

然而，目前細(xì)胞培養(yǎng)多選擇的是血清培養(yǎng)基，雖然血清中含有豐富全面的細(xì)胞生長(zhǎng)必需的營(yíng)養(yǎng)，可以提供維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素，生長(zhǎng)因子以及一些低分子量營(yíng)養(yǎng)物，然而，這種培養(yǎng)基中的血清有時(shí)含有細(xì)胞生長(zhǎng)抑制因子和毒性因子，存在潛在毒性，且血清獲取成本高，價(jià)格較貴。

基于此，中國(guó)專(zhuān)利CN101914490B公開(kāi)了一種人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基及其培養(yǎng)方法，該培養(yǎng)基不含動(dòng)物血清，是在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中添加人血清白蛋白、人轉(zhuǎn)鐵蛋白、人胰島素和亞硒酸鈉形成的，雖然不受倫理限制及異種免疫原性，但是這種培養(yǎng)基中添加了多種蛋白，容易對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性，降低細(xì)胞數(shù)量，且加入的蛋白質(zhì)種類(lèi)多，增加了培養(yǎng)基的制作成本高。

綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)中的培養(yǎng)基普遍具有細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)量少，成本高，容易對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性作用的缺點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)普遍存在的缺點(diǎn)，本發(fā)明提供了一種人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基。本發(fā)明提供的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，可以促進(jìn)細(xì)胞分裂，在一定時(shí)間內(nèi)，培養(yǎng)更多的細(xì)胞，且不加入血清，減少了血清對(duì)細(xì)胞的毒性作用及血清源性污染。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明的采用的技術(shù)方案為：

一種人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基，包括高級(jí)RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基，細(xì)胞生長(zhǎng)因子，Ultroser G血清替代物，L-谷氨酰胺及金銀花粉；所述高級(jí)RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基的加入量為20～30g/L，所述細(xì)胞生長(zhǎng)因子的加入量為1～3μg/L，所述Ultroser G血清替代物的加入量為40～60mg/L，所述L-谷氨酰胺的加入量為3～5μg/L，所述金銀花粉的加入量為2～4μg/L。

優(yōu)選地，所述高級(jí)RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基的加入量為25g/L，所述細(xì)胞生長(zhǎng)因子的加入量為2μg/L，所述Ultroser G血清替代物的加入量為50mg/L，所述L-谷氨酰胺的加入量為4μg/L，所述金銀花粉的加入量為3μg/L。

優(yōu)選地，所述細(xì)胞生長(zhǎng)因子由PDGF、VEGF及EGF按質(zhì)量比1～3：2～5：9～11組成。

優(yōu)選地，所述細(xì)胞生長(zhǎng)因子由PDGF、VEGF及EGF按質(zhì)量比2：3：10組成。

優(yōu)選地，所述金銀花粉的制備過(guò)程為：取干燥的金銀花，稱(chēng)量1g，用研磨器磨碎，然后過(guò)300目篩，即得。

本發(fā)明還提供了所述人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)基的制備方法，包括如下步驟：

S1、取400mL純化水加熱至50～60℃，然后向其中加入高級(jí)RPMI-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基及L-谷氨酰胺，攪拌混合均勻，得混合物I；