[發明專利]新殼聚糖酶CHI2、其編碼基因及其應用

有效

• 申請號: 202010493312.6
• 申請日: 2020-06-03
• 公開（公告）號: CN111705048B
• 公開（公告）日: 2021-11-30
• 發明（設計）人: 程凡升
• 申請（專利權）人: 青島農業大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N15/56;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/26;C12P19/14;A01N63/50;A01P3/00;C12N1/06;C12R1/19
• 代理公司: 青島鼎丞智佳知識產權代理事務所(普通合伙) 37277
• 代理人: 韓耀朋

1.新殼聚糖酶CHI2，其特征在于，該酶的氨基酸序列為如Seq ID No:1所示的氨基酸序列。

2.如權利要求1所述的新殼聚糖酶CHI2的編碼基因，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列為如Seq ID No:2所示的核苷酸序列。

3.重組表達載體，其特征在于，是將權利要求2所述的編碼基因或將權利要求1所述的氨基酸序列的編碼基因連接到表達載體所形成。

4.根據權利要求3所述的重組表達載體，其特征在于，所述表達載體為pEASY系列載體、pET系列載體或pGEM系列載體。

5.工程菌，其特征在于，所述工程菌中轉化有如權利要求3所述的重組表達載體，能表達權利要求1所述的新殼聚糖酶。

6.一種生產如權利要求1所述的新殼聚糖酶的方法，其特征在于，包括以下步驟：在適合于所述新殼聚糖酶生產的條件下，對權利要求5所述的工程菌進行發酵，并對發酵產物進行分離和純化，最終得到殼聚糖酶。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）工程菌的構建：利用特異引物擴增殼聚糖酶目的基因，并回收目的基因后將其連接到表達載體上，構建形成重組表達載體，將重組表達載體轉化到宿主菌后，得到生產高活性殼聚糖酶的工程菌；

（2）工程菌的發酵：將工程菌種子液以1%接種量接種于含抗生素的LB液體培養基中，37℃，250 r/min振搖培養至OD600=0.6時，加入終濃度為1 mM的IPTG，20℃低溫誘導，250 r/min振搖培養16小時，進行菌體沉淀，或者進一步的擴大培養，收集菌體沉淀；

（3）殼聚糖酶的分離和純化：將菌體沉淀進行破壁處理，迅速將細胞破壁液于4℃，12000 r/min離心20分鐘，收集上清液；采用過Ni-NTA柱的方法對上清液進行純化，再進行透析后，得到高純度的重組殼聚糖酶液。

8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述表達載體為pEASY系列載體、pET系列載體或pGEM系列載體；宿主菌為大腸桿菌BL21或大腸桿菌Rosetta。

9.如權利要求1所述的新殼聚糖酶在寡聚糖制備、水產品下腳料處理中的應用。