[發明專利]一種促肝細胞生長素的制備方法有效
| 申請號： | 202010486589.6 | 申請日： | 2020-06-01 |
| 公開（公告）號： | CN111574612B | 公開（公告）日： | 2020-12-22 |
| 發明（設計）人： | 黃金維;羅四通;羅廣生;鄧小蘭 | 申請（專利權）人： | 廣東宏遠集團藥業有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/475 | 分類號： | C07K14/475;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C12P21/06 |
| 代理公司： | 廣州科沃園專利代理有限公司 44416 | 代理人： | 張帥 |
| 地址： | 523109 廣東*** | 國省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 肝細胞 生長素 制備 方法 | ||
1.一種促肝細胞生長素的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1.乳豬肝預處理：取乳豬肝臟，去筋膜、結締組織，用水洗凈，切成2～5cm小塊，稱重，按1: 0.5～3 (W/V)加入純化水，置于高速組織勻漿機中攪拌成粒徑為0.5～2mm的乳豬肝勻漿；
S2.酶解處理：將步驟S1得到的乳豬肝勻漿加蒸餾水配置成質量濃度為1～9％的底物，調節底物的pH值，水浴加熱，然后加入沉淀劑和1000～5000U/g中性蛋白酶，在40～60℃溫度下恒溫磁力攪拌酶解，得酶解液；
S3.滅活、離心：將步驟S2得到的酶解液在70～100℃水浴保溫，然后冷卻至室溫，再進行離心得離心液；
S4.將步驟S3得到的離心液先經過截留分子量為100kDa的中空纖維超濾裝置進行第一次過濾后，再用截留分子量為6～10kDa的超濾膜進行超濾，濾液減壓濃縮，即得促肝細胞生長素；
所述沉淀劑包括L-巖藻糖和羧甲基纖維素鈉；
所述L-巖藻糖和羧甲基纖維素鈉的質量比為2～3.5:1。
2.根據權利要求1所述的促肝細胞生長素的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中用1mol/L鹽酸或1mol/L氫氧化鈉調節底物的pH值為6～8。
3.根據權利要求2所述的促肝細胞生長素的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中用1mol/L鹽酸或1mol/L氫氧化鈉調節底物的pH值為6.5。
4.根據權利要求1所述的促肝細胞生長素的制備方法，其特征在于，所述步驟S2中水浴加熱的溫度為40～60℃，水浴加熱時間為5～10min。
5.根據權利要求1所述的促肝細胞生長素的制備方法，其特征在于，所述步驟S2酶解時間為1～3.5h。
6.根據權利要求1所述的促肝細胞生長素的制備方法，其特征在于，所述步驟S3中酶解液在70～100℃水浴保溫5～20min。
7.根據權利要求1所述的促肝細胞生長素的制備方法，其特征在于，所述步驟S3離心速度為3000～5000r/min，離心時間為10～20min。
8.根據權利要求1所述的促肝細胞生長素的制備方法，其特征在于，所述步驟S4濾液在60～90℃條件下減壓濃縮。
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