[發明專利]一種六勝肽的規模化合成方法

有效

• 申請號: 202010484374.0
• 申請日: 2020-06-01
• 公開（公告）號: CN111620928B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 李晨;梁強;王昕;張忠旗;王惠嘉;王萬科;楊小琳;趙金禮
• 申請（專利權）人: 陜西慧康生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/02;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

本發明公開了一種六勝肽的規模化合成方法，該方法是以2?Chlorotrityl Chloride Resin為載體，固相合成Ac?Glu(OtBu)?Glu(OtBu)?Met?Gln(Trt)?Arg(Pbf)?Arg(Pbf)?OH全保護肽酸，然后以全保護肽酸為原料，通過液相酰胺化反應合成Ac?Glu(OtBu)?Glu(OtBu)?Met?Gln(Trt)?Arg(Pbf)?Arg(Pbf)?NH₂全保護酰胺，并選用1?羥基苯并三唑和N,N′?二異丙基碳二亞胺為縮合試劑，采用2,4?二甲氧基芐胺進行二次酰胺化反應除去少量未反應完全的全保護肽酸，最后脫除保護基、反相制備色譜純化，得到目標肽。本發明制備純化難度低的優點，可用于規模化合成六勝肽。

技術領域

本發明屬于多肽合成技術領域，具體涉及一種固-液結合的六勝肽合成方法。

背景技術

六勝肽，又叫阿基瑞林、乙酰基六肽-8，最初是從南極灣冰河泥中所發現的菌種，是一種具有除皺功能的活性多肽，序列為Ac-Glu-Glu-Met-Gln-Arg-Arg-NH₂，是由突觸蛋白SNAP-25的氮端(AA12～17)衍生而來的六個氨基酸肽鏈，能與SNARE三元復合物相互作用，抑制嗜鉻細胞中受Ca²⁺調控的兒茶酚胺釋放，從而阻止神經-肌肉間的乙酰膽堿傳導，引起肌肉麻痹。六勝肽是肉毒毒素類的安全替代品，由于能夠阻斷神經肌肉間的信息傳導，避免肌肉過度收縮，皮下新合成的膠原蛋白得以重排，皺紋緩解甚至消除。10％乳液涂抹眼角30天，可使眼角魚尾紋深度減少30％。因此，多用于化妝品內作為抗皺成分。

目前，六勝肽的合成方法主要有固相合成法和液相分段合成法。目前已公開的幾種合成方法，均存在不同的局限性。固相合成法的特點是將肽鏈連接在固相載體，通過過量反應物提高反應收率，同時反復洗滌就能除去雜質，節省了反應時間。然而，固相載體多選用氨基型Linker樹脂，如Rink Amide AM Resin或者Rink Amide MBHA Resin，這一類樹脂的特點是上載量較小，價格普遍昂貴，達到規模化合成原料成本就足以昂貴，一般只能進行小批量合成，限制了六勝肽的產業化。例如，CN 103694316A采用Rink Amide MBHA Resin作為樹脂載體固相合成，取代度僅為0.5mmol/g，且價格昂貴，必然造成成本昂貴，不適用于大規模生產。

液相分段合成法的特點是原料成本降低，但液相反應時間普遍較長，中間過程需柱層析或重結晶等純化分離步驟，人工成本驟升。如CN 103613642A采用液相分段合成，原料成本降低，但合成周期長，效率低，純化成本高，不適用于規模化合成。CN 106632609A采用固-液結合的合成策略，優先液相合成Fmoc-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH片段，再與RinkAmide AM Resin連接。精氨酸二肽片段在多肽合成領域作為困難序列，不管作為氨基組分和羧基組分，液相合成都較為困難且難以保證純度，本質上固相載體未發生改變，不適用于大規模合成。CN 196749529A采用固-液結合的合成策略，改變了合成載體，選用六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷、1-羥基苯丙三唑合成活化酯，選用氯化銨作為氨試劑，但氯化銨作為無機鹽，在有機溶劑N,N-二甲基甲酰胺溶解度很小，故此酰胺化反應轉化率不超過70％，原料剩余同時存在消旋風險，合成收率低且純度無法保證，不利于規模合成。