[發明專利]一種六勝肽的規模化合成方法

有效

• 申請號: 202010484374.0
• 申請日: 2020-06-01
• 公開（公告）號: CN111620928B
• 公開（公告）日: 2023-02-28
• 發明（設計）人: 李晨;梁強;王昕;張忠旗;王惠嘉;王萬科;楊小琳;趙金禮
• 申請（專利權）人: 陜西慧康生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;C07K1/02;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.一種六勝肽的規模化合成方法，其特征在于：以2-Chlorotrityl Chloride Resin為載體，固相合成全保護樹脂肽Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-2-Chlorotrityl Chloride Resin，所述全保護樹脂肽經切割液裂解后獲得全保護肽酸Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-OH，所述全保護肽酸與氨水進行液相酰胺化反應，得到全保護酰胺Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH₂粗品，所述粗品經二次液相酰胺化反應，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH₂與Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物，所得混合物經脫除保護基、反相制備色譜純化、冷凍干燥，得到六勝肽純品；

上述二次液相酰胺化反應的方法為：將Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH₂粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入1-羥基苯并三唑、N,N′-二異丙基碳二亞胺，并在該溫度下反應40～90分鐘，然后加入2,4-二甲氧基芐胺，繼續在該溫度下反應5～7小時，再將反應液加入1.5～3倍體積的質量濃度為20％～40％的檸檬酸水溶液中，析出沉淀，過濾，沉淀用飽和食鹽水洗滌后40～45℃烘干，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH₂與Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物。

2.根據權利要求1所述的六勝肽的規模化合成方法，其特征在于所述二次液相酰胺化反應的方法為：將Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH₂粗品溶于N,N-二甲基甲酰胺中，在0～5℃下加入1-羥基苯并三唑、N,N′-二異丙基碳二亞胺，并在該溫度下反應60分鐘，然后加入2,4-二甲氧基芐胺，繼續在該溫度下反應6小時，再將反應液加入2倍體積的質量濃度為30％的檸檬酸水溶液中，析出沉淀，過濾，沉淀用飽和食鹽水洗滌后40～45℃烘干，得到Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH₂與Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物。

3.根據權利要求1或2所述的六勝肽的規模化合成方法，其特征在于：Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH₂粗品與1-羥基苯并三唑、N,N′-二異丙基碳二亞胺、2,4-二甲氧基芐胺的摩爾比為1:1.5～2.0:1.5～2.0:2.0～3.0。

4.根據權利要求1所述的六勝肽的規模化合成方法，其特征在于所述脫除保護基的方法為：向Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-NH₂與Ac-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Met-Gln(Trt)-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Dmb混合物中加入脫除側鏈基團切割液，攪拌反應2～3小時，減壓脫除溶劑，向濃縮液中加入乙酸乙酯，離心析出沉淀，石油醚洗滌，得到六勝肽粗品。

5.根據權利要求4所述的六勝肽的規模化合成方法，其特征在于：所述脫除側鏈基團切割液為三氟乙酸、三異丙基硅烷、苯甲硫醚、水、二氯甲烷體積比為80:5:4:3:8的混合液。