[發明專利]一種與中樞神經衰老相關的乙酰化修飾H2B蛋白標記分子及其應用

在審

• 申請號: 202010482938.7
• 申請日: 2020-06-01
• 公開（公告）號: CN112062826A
• 公開（公告）日: 2020-12-11
• 發明（設計）人: 季煜華;陳子鑫;季秋虹
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;G01N33/68;G01N30/02;G01N30/72
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 蘇運貞

1.一種與中樞神經衰老相關的乙酰化修飾H2B蛋白標記分子，其特征在于：所述的與中樞神經衰老相關的乙酰化修飾H2B蛋白標記分子是第6位、第12位、第13位、第16位、第17位、第21位、第24位、第44位和第109位中的部分或全部賴氨酸經乙酰化修飾的H2B蛋白。

2.根據權利要求1所述的與中樞神經衰老相關的乙酰化修飾H2B蛋白標記分子，其特征在于：所述的H2B蛋白為H2B1M、H2B1B、H2B2B中的至少一種。

3.根據權利要求2所述的與中樞神經衰老相關的乙酰化修飾H2B蛋白標記分子，其特征在于：所述的H2B1M的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；

所述的H2B1B的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；

所述的H2B2B的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。

4.權利要求1～3任一項所述的與中樞神經衰老相關的乙酰化修飾H2B蛋白標記分子在細胞、組織、器官或個體衰老程度檢測中的應用。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于包括如下步驟：

(1)動物細胞或組織的蛋白提取、純化和定量；

(2)對純化的蛋白進行酶解；

(3)特異性抗體對乙酰化修飾肽段富集；

(4)基于液相色譜質譜聯用技術定量分析細胞或組織蛋白的乙酰化修飾；

(5)通過定量分析結果評估細胞、組織、器官或個體的衰老程度。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：

步驟(4)中所述的定量分析過程包括如下步驟：

1)將富集的乙酰化修飾肽段重懸，進行分離；

2)接著進行質譜鑒定，得到質譜原始數據；

3)質譜原始數據通過Maxquant軟件進行搜庫，從而獲得肽段信息列表；

步驟(5)中所述的評估的標準如下：所述的與中樞神經衰老相關的乙酰化修飾H2B蛋白標記分子的總乙酰化修飾上調程度和衰老程度呈正相關。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：

步驟1)中所述的分離優選通過EasyNano LC1000系統進行；

步驟2)中所述的質譜鑒定為使用Orbitrap Fusion Lumos質譜儀；

步驟3)中所述的搜庫的參數如下：a)樣本類型為standard，multiplicity為1；b)蛋白質消化酶為：Trypsin；c)固定修飾：Carbamidomethyl C；d)可變修飾為Acetyl K，Deamidation N，Deamidation NQ；e)最小肽段長度為6；f)肽段和蛋白的錯配率閾值都小于0.01；g)用于蛋白質定量的肽段修飾為Acetyl K，肽段為unique。

8.根據權利要求5所述的應用，其特征在于：

步驟(1)中所述的動物為小鼠；

步驟(1)中所述的組織為腦組織；

步驟(1)中所述的定量的方法為Bradford法；

步驟(2)中所述的酶解采用FASP酶解方法實現；

步驟(3)中所述的特異性抗體為抗乙酰賴氨酸抗體；

步驟(3)中所述的富集為通過免疫親和沉淀實現。

9.權利要求1～3任一項所述的與中樞神經衰老相關的乙酰化修飾H2B蛋白標記分子在制備預測衰老相關的退行性疾病的試劑盒中的應用。

10.權利要求1～3任一項所述的與中樞神經衰老相關的乙酰化修飾H2B蛋白標記分子在制備預防和/或治療衰老相關的退行性疾病的藥物中的應用。