[發(fā)明專利]常溫等溫快速檢測貓細小病毒的引物、探針、試劑及方法

在審

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• 申請日: 2020-05-30
• 公開（公告）號: CN111733284A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設計）人: 劉瓊瑤;宋文鳳;婁志英;劉國憲
• 申請（專利權）人: 濰坊安普未來生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京中索知識產權代理有限公司 11640
• 代理人: 陳賓賓

本發(fā)明適用于貓細小病毒檢測技術領域，提供了一種常溫等溫快速檢測貓細小病毒的引物、探針、試劑及方法。本發(fā)明可以對貓細小病毒進行快速、實時、特異性檢測，通過特異性引物、特異性熒光探針、5種工程酶、其它化學組分的共同作用下，在具備熒光檢測功能的儀器中實現核酸目標物的快速檢測，并通過嚴格的實驗操作步驟保證閉管檢測，有效防止氣溶膠污染，適合應用于多種熒光檢測設備進行檢測。

技術領域

本發(fā)明涉及貓細小病毒檢測技術領域，尤其涉及一種常溫等溫快速檢測貓細小病毒的引物、探針、試劑及方法。

背景技術

貓細小病毒(Feline panleukopenia virus)又稱貓泛白細胞減少癥病毒、貓瘟病毒，為細小病毒科，細小病毒屬的單鏈DNA病毒，可以引起貓食欲不振、高燒、嗜睡、流鼻涕、脫水嘔吐、白細胞嚴重減少以及出血性腸炎等癥狀。貓細小病毒不感染人類，但是其在環(huán)境中可存活長達一年，所以貓很容易暴露在有該病毒的環(huán)境中而發(fā)生感染，尤其幼貓極易感染，1歲以下的貓感染率可達70％，死亡率為50％～60％，5月齡以下的幼貓死亡率最高可達80％～90％；懷孕的母貓如果感染了該病毒會導致繁殖障礙，引起流產或生下小腦嚴重受損的小貓。

目前貓細小病毒的診斷方法多為血清學方法和病毒分離鑒定，其靈敏度低，無法對早期感染進行確診；而基于PCR的診斷方法耗時長，技術要求高，設備昂貴，無法普及。

綜上可知，現有技術在實際使用上顯然存在不便與缺陷，所以有必要加以改進。

發(fā)明內容

針對上述的缺陷，本發(fā)明的目的在于提供一種常溫等溫快速檢測貓細小病毒的引物、探針試劑及方法，其可以對貓細小病毒進行快速、實時、特異性檢測，適合應用于多種熒光檢測設備進行檢測。

為了實現上述目的，本發(fā)明提供一種常溫等溫快速檢測貓細小病毒的引物和探針，所述引物和探針的序列為：

上游引物VP2-F1：CATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATAC；

下游引物VP2-R2：CACCTGTTCTTAGTAAGTGYACTGGCACAG；

探針VP2-Probe：

CAATGGGATAGGACATTAATACCATCTCA(F)A(H)(B)GGAACTAGTGGC-C3 Spacer；

其中，F為熒光基團，H為四氫呋喃，B為淬滅基團，3’末端標記C3間臂。

本發(fā)明的特異性引物，是針對貓細小病毒的衣殼蛋白(Capsid proteins)的VP2基因設計的寡核苷酸。有兩條寡核苷酸組成一對引物，分別特異性識別一個核酸目標物的上下游核苷酸序列；長度在30-35核苷酸(nt)之間，序列中無回文序列、連續(xù)單堿基重復序列和內部二級結構區(qū)；引物Tm值不作為設計時主要考慮因素；最佳引物對需通過試驗優(yōu)化篩選出，其擴增產物為單一條帶，無非特異性擴增和明顯的引物二聚體。