[發明專利]常溫等溫快速檢測貓細小病毒的引物、探針、試劑及方法

在審

• 申請號: 202010480277.4
• 申請日: 2020-05-30
• 公開（公告）號: CN111733284A
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 劉瓊瑤;宋文鳳;婁志英;劉國憲
• 申請（專利權）人: 濰坊安普未來生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 北京中索知識產權代理有限公司 11640
• 代理人: 陳賓賓

1.一種常溫等溫快速檢測貓細小病毒的引物和探針，其特征在于，所述引物和探針的序列為：

上游引物VP2-F1：CATTGATGGTTGCATTAGATAGTAATAATAC；

下游引物VP2-R2：CACCTGTTCTTAGTAAGTGYACTGGCACAG；

探針VP2-Probe：

CAATGGGATAGGACATTAATACCATCTCA(F)A(H)(B)GGAACTAGTGGC-C3 Spacer；

其中，F為熒光基團，H為四氫呋喃，B為淬滅基團，3’末端標記C3間臂。

2.一種常溫等溫快速檢測貓細小病毒的試劑，其特征在于，包括如權利要求1所述的引物和探針。

3.根據權利要求2所述的常溫等溫快速檢測貓細小病毒的試劑，其特征在于，所述試劑還包括聚乙二醇、Tris、乙酸鉀、二硫蘇糖醇、酸磷酸腺苷、磷酸肌酸二鈉鹽、磷酸肌酶、脫氧核糖核苷三磷酸、海藻糖、甘露醇、重組酶、單鏈DNA結合蛋白、DNA聚合酶、輔助蛋白及核酸外切酶。

4.根據權利要求3所述的常溫等溫快速檢測貓細小病毒的試劑，其特征在于，所述試劑的制備方法包括：

將反應液在-80℃條件下預凍1～1.5小時得到預凍試劑；

將預凍試劑先置于-35～-45℃環境下干燥2～10小時，再置于10～18℃環境下干燥1～2小時，得到凍干粉。

5.根據權利要求3所述的常溫等溫快速檢測貓細小病毒的試劑，其特征在于，各組份的濃度范圍如下：

重組酶520-725ng/μl；單鏈DNA結合蛋白100-200ng/μl；DNA聚合酶350-450ng/μl；核酸外切酶300-400ng/μl。

6.根據權利要求5所述的常溫等溫快速檢測貓細小病毒的試劑，其特征在于，各組份的濃度范圍如下：

聚乙二醇，2-4％；Tris，20-40mM；乙酸鉀，100-140mM；二硫蘇糖醇，4-8mM；酸磷酸腺苷，2-4mM；磷酸肌酸二鈉鹽，40-60mM；磷酸肌酶，80-120ng/μl；脫氧核糖核苷三磷酸，250-300μM；海藻糖，5-8％；甘露醇，20-40ng/μl。

7.一種通過如權利要求3～6任一項所述試劑實現的常溫等溫快速檢測貓細小病毒的方法，其特征在于，所述方法包括：

在裝有所述試劑的反應管中加待檢樣本、雙蒸水和緩沖液；

置于一溫控設備中孵育15～25分鐘，再通過具備熒光檢測功能的儀器進行可視化檢測，檢測過程保持反應管密閉。

8.根據權利要求7所述的方法，所述溫控設備保持一恒定溫度，且該溫度范圍為20℃-42℃。