[發明專利]一種能夠得到完整外泌體的免疫磁珠分離方法

在審

• 申請號: 202010480003.5
• 申請日: 2020-05-29
• 公開（公告）號: CN111575228A
• 公開（公告）日: 2020-08-25
• 發明（設計）人: 曾鵬;張亞楠
• 申請（專利權）人: 上海思路迪生物醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 北京市蘭臺律師事務所 11354
• 代理人: 于越

1.一種能夠得到完整外泌體的免疫磁珠分離方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、向免疫磁珠-外泌體復合物重懸液中依照1mg免疫磁珠-外泌體復合物對應2～100μg胰蛋白酶的配比加入胰蛋白酶混勻，得到消化組合物；

S2、將所述消化組合物置于溫度范圍20℃至40℃進行消化反應，持續時間1至10分鐘，得到第一分離組合物；

S3、向所述第一分離組合物內添加等量于胰蛋白酶加入量的胰蛋白酶抑制劑并混合均勻，得到第二分離組合物；

S4、對所述第二分離組合物進行磁分離，所得上清部分即為外泌體溶液。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫磁珠-外泌體復合物重懸液包括采用PBS溶劑的重懸液。

3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S1包括依照1mg免疫磁珠-外泌體復合物對應25μg胰蛋白酶的配比加入胰蛋白酶混合，得到消化組合物。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟S2包括將所述消化組合物置于恒溫37℃中進行消化反應，持續時間3分鐘，得到第一分離組合物。

5.如權利要求1或4所述的方法，其特征在于，所述步驟S1中加入胰蛋白酶混合包括加入胰蛋白酶水溶液；所述胰蛋白酶水溶液包括溶解有胰蛋白酶的不含二價金屬離子的水溶液。

6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述胰蛋白酶包括豬胰蛋白酶、牛胰蛋白酶、羊胰蛋白酶或基因工程表達的胰蛋白酶；所述胰蛋白酶抑制劑包括大豆胰蛋白酶抑制劑。

7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述免疫磁珠包括粒徑10nm至10μm的免疫磁珠；所述免疫磁珠包括帶有以下表面包被抗體：CD9、CD63、CD81、CD44、CD31、Rab5b、EpCAM、TSG101、HSP90、HSP70、ANXA5、FLOT1、ICAM1、ALIX、GM130、ICAM-1、SNAP、MHCI/II、HLA-G、Integrins、Claudins、Tim4，且所述抗體包括單克隆抗體或多克隆抗體。

8.如權利要求1至8任一項所述的方法在血漿、血清、尿液、乳汁、腦脊液、腫瘤腹水、唾液、細胞培養上清中分離外泌體的應用。