[發(fā)明專利]一種線蟲幼蟲活力檢測(cè)方法及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010470462.5
• 申請(qǐng)日: 2020-05-28
• 公開（公告）號(hào): CN111494651B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王文龍;陸靜;呂旭;翟帥;劉春霞;劉曉磊;蘇倩;王騰宇;林洋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K49/00
• 分類號(hào): A61K49/00
• 代理公司: 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

本發(fā)明涉及幼蟲活力檢測(cè)領(lǐng)域，具體公開了一種線蟲幼蟲活力檢測(cè)方法及應(yīng)用。本發(fā)明的線蟲幼蟲活力檢測(cè)方法包括：(1)以亞甲基藍(lán)作為染色劑對(duì)所述線蟲幼蟲進(jìn)行染色；(2)5～7min后，根據(jù)所述線蟲幼蟲的顏色判定所述線蟲幼蟲的活力。當(dāng)所述線蟲幼蟲為藍(lán)色或淡藍(lán)色時(shí)，判定所述線蟲幼蟲為死亡或低活力幼蟲；當(dāng)所述線蟲幼蟲為未染色狀態(tài)時(shí)，判定所述線蟲幼蟲為高活力幼蟲。本發(fā)明利用MB為染色劑根據(jù)染色深淺效果直觀的鑒別消化道線蟲幼蟲的活力情況，方便快捷、低成本，可有效避免主觀判斷差異，為研究驅(qū)蟲藥藥效、耐藥性等方面提供了幫助，對(duì)選擇敏感藥物指導(dǎo)臨床用藥等意義重大。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及幼蟲活力檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)，涉及一種線蟲幼蟲活力檢測(cè)方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

線蟲是一類常見(jiàn)的寄生蟲，多在動(dòng)物消化道內(nèi)寄生，對(duì)宿主的健康產(chǎn)生著不利影響。因此，對(duì)于祛除線蟲的方式，現(xiàn)有技術(shù)中進(jìn)行著大量研究，但目前的常用驅(qū)蟲藥普遍存在耐藥性問(wèn)題，困擾著例如家畜養(yǎng)殖等領(lǐng)域。

綿羊消化道線蟲病是危害養(yǎng)羊業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一，感染極為普遍，易造成較大的經(jīng)濟(jì)損失，是養(yǎng)殖時(shí)防治的重點(diǎn)。在生產(chǎn)實(shí)踐中，由于長(zhǎng)期不科學(xué)的應(yīng)用驅(qū)蟲藥，許多消化道線蟲都對(duì)常用驅(qū)蟲藥產(chǎn)生了不同程度的耐藥性，有效的抗寄生蟲藥越來(lái)越少，使綿羊寄生蟲病呈泛濫態(tài)勢(shì)。因此，需要不斷地投入大量的人力、物力研發(fā)新的抗寄生蟲藥物，以滿足生產(chǎn)需要。在新的驅(qū)蟲藥物被研發(fā)并應(yīng)用于臨床之前，研究方便快捷的耐藥性檢測(cè)方法，選擇敏感驅(qū)蟲藥進(jìn)行及時(shí)有效驅(qū)蟲尤為重要。

目前應(yīng)用的寄生蟲耐藥性體外檢測(cè)的方法大多針對(duì)寄生蟲幼蟲，通過(guò)藥物對(duì)寄生蟲幼蟲活力的影響或致死率來(lái)判斷寄生蟲對(duì)驅(qū)蟲藥的敏感性，而現(xiàn)有的寄生蟲幼蟲活力檢測(cè)方法存在諸如主觀判斷差異、結(jié)果不穩(wěn)定、判斷過(guò)程復(fù)雜等弊端，很難做到檢測(cè)結(jié)果的一致性和標(biāo)準(zhǔn)化，難以在生產(chǎn)實(shí)踐中推廣應(yīng)用。

因此，有必要提供一種新的線蟲幼蟲活力檢測(cè)方法及應(yīng)用以解決現(xiàn)有技術(shù)中的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問(wèn)題，本發(fā)明的目的是提供一種有效避免主觀判斷差異，方便快捷、低成本的線蟲幼蟲活力測(cè)試方式。

為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明該目的，本發(fā)明的技術(shù)方案如下：

一種線蟲幼蟲活力檢測(cè)方法，包括：

(1)以亞甲基藍(lán)作為染色劑對(duì)所述線蟲幼蟲進(jìn)行染色；

(2)5～7min后，根據(jù)所述線蟲幼蟲的顏色判定所述線蟲幼蟲的活力。

本發(fā)明采用MB染色法，通過(guò)直接觀察(消化道)線蟲幼蟲的著色情況來(lái)精確判定幼蟲的活力，該方法穩(wěn)定可靠，重復(fù)性和適用性強(qiáng)，操作簡(jiǎn)單。本發(fā)明所指的線蟲幼蟲可為第一至第三期幼蟲。一般線蟲蟲卵在27℃的條件下，約12～34h發(fā)育至第一期幼蟲，約37～96h發(fā)育為第二期幼蟲，約97～168h發(fā)育至第三期幼蟲。

現(xiàn)有的靜止期幼蟲形態(tài)分析等試驗(yàn)均需要鑒別幼蟲的活力，但鑒別方法各有不同，且都存在主觀判斷差異、判斷過(guò)程復(fù)雜、試驗(yàn)結(jié)果不穩(wěn)定等問(wèn)題，很難做到檢測(cè)結(jié)果的一致性、可靠性和標(biāo)準(zhǔn)化，影響了試驗(yàn)的準(zhǔn)確性和適用范圍，難以在生產(chǎn)實(shí)踐中推廣應(yīng)用。將本發(fā)明的MB染色法應(yīng)用于靜止期幼蟲形態(tài)分析等試驗(yàn)，則能使結(jié)果判定過(guò)程簡(jiǎn)單化、操作標(biāo)準(zhǔn)化，有效避免了主觀判斷差異、各個(gè)實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)不統(tǒng)一、判斷過(guò)程復(fù)雜等弊端，極大地?cái)U(kuò)展了靜止期幼蟲形態(tài)分析等試驗(yàn)的實(shí)用性，有望在生產(chǎn)實(shí)踐中推廣應(yīng)用。

現(xiàn)有用于生物染色的染料種類眾多，用于蟲卵染色的方案也有報(bào)道，但本發(fā)明經(jīng)大量研究發(fā)現(xiàn)，對(duì)于線蟲幼蟲(尤其是捻轉(zhuǎn)血矛線蟲的幼蟲)，采用本發(fā)明的染色方案才能更好地、簡(jiǎn)便快捷地實(shí)現(xiàn)活力判斷的效果。

本發(fā)明的步驟(2)中判定所述線蟲幼蟲的活力的方法為：當(dāng)所述線蟲幼蟲為藍(lán)色或淡藍(lán)色時(shí)，判定所述線蟲幼蟲為死亡或低活力幼蟲；當(dāng)所述線蟲幼蟲為未染色狀態(tài)時(shí)，判定所述線蟲幼蟲為高活力幼蟲。