[發明專利]一種線蟲幼蟲活力檢測方法及應用

有效

• 申請號: 202010470462.5
• 申請日: 2020-05-28
• 公開（公告）號: CN111494651B
• 公開（公告）日: 2023-01-03
• 發明（設計）人: 王文龍;陸靜;呂旭;翟帥;劉春霞;劉曉磊;蘇倩;王騰宇;林洋
• 申請（專利權）人: 內蒙古農業大學
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 陳征

1.一種線蟲幼蟲活力檢測方法，其特征在于，包括：

(1)以亞甲基藍作為染色劑對所述線蟲幼蟲進行染色；

(2)5～7min后，根據所述線蟲幼蟲的顏色判定所述線蟲幼蟲的活力；

步驟(2)中判定所述線蟲幼蟲的活力的方法為：當所述線蟲幼蟲為藍色或淡藍色時，判定所述線蟲幼蟲為死亡或低活力幼蟲；當所述線蟲幼蟲為未染色狀態時，判定所述線蟲幼蟲為高活力幼蟲；所述線蟲幼蟲為捻轉血矛線蟲的幼蟲。

2.根據權利要求1所述的檢測方法在非疾病診斷或治療目的的線蟲幼蟲耐藥性體外檢測中的應用。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述線蟲幼蟲由以下方式獲得：

(1)制備線蟲蟲卵混懸液

以500μm、145μm、20μm三種篩子從上到下依次排列，將含有線蟲蟲卵的宿主糞便的懸混液倒入最上層的500μm篩子，在所述宿主糞便的懸混液依次通過所述三種篩子后，收集20μm篩子表面的物質并將所述物質在生理鹽水中進行第一次離心；將所述第一次離心獲得的沉淀物在飽和鹽水中進行第二次離心；將所述第二次離心的上清液倒入20μm篩子進行再次過濾，并用生理鹽水漂洗20μm篩子表面的再次過濾后的物質后，將所述再次過濾后的物質以生理鹽水進行第三次離心；將所述第三次離心獲得的沉淀物以PBS緩沖液稀釋獲得所述線蟲蟲卵混懸液；

(2)將步驟(1)中制備得到的所述線蟲蟲卵混懸液中的線蟲蟲卵培養為所述線蟲幼蟲。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，每克所述宿主糞便的線蟲蟲卵數大于等于15000個；

和/或，所述宿主糞便的懸混液的固液比為1：(4.5-5.5)g/mL。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，所述宿主糞便的懸混液的固液比為1：5g/mL。

6.根據權利要求3-5任一項所述的應用，其特征在于，所述第一次離心的轉速為2800-3200r/min，時間為4-6min；所述第二次離心的轉速為2800-3200r/min，時間為2-4min；所述第三次離心的轉速為2800-3200r/min，時間為4-6min。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述第一次離心的轉速為3000r/min，時間為5min；所述第二次離心的轉速為3000r/min，時間為3min；所述第三次離心的轉速為3000r/min，時間為5min。

8.根據權利要求3-5、7任一項所述的應用，其特征在于，所述PBS緩沖液中含有兩性霉素B和青鏈霉素，所述兩性霉素B的濃度為250mg/L，所述青鏈霉素的濃度為10mL/L。

9.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，所述PBS緩沖液中含有兩性霉素B和青鏈霉素，所述兩性霉素B的濃度為250mg/L，所述青鏈霉素的濃度為10mL/L。

10.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，所述青鏈霉素中青霉素的濃度為10000U/mL，鏈霉素的濃度為10000μg/mL。

11.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述青鏈霉素中青霉素的濃度為10000U/mL，鏈霉素的濃度為10000μg/mL。