[發明專利]一種細胞病理學樣本的多重染色制片方法

有效

• 申請號: 202010468262.6
• 申請日: 2020-05-28
• 公開（公告）號: CN112113821B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 楚文江;王劍
• 申請（專利權）人: 王劍
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;李唐

本發明涉及一種細胞病理學樣本的多重染色制片方法。具體地，涉及對細胞樣本進行液相免疫組化染色和/或核酸免疫原位雜交染色以及常規的細胞病理學染色的多重染色方法。本發明還涉及由所述方法得到的離體細胞，載有所述細胞的病理切片，以及用于該方法的試劑盒。

技術領域

本發明涉及細胞病理學領域的一種細胞多重染色制片方法。該方法可以在細胞樣本上，同時顯示詳細的細胞形態學特點，和一個或者多個特定生物標記物的表達信息。染色結果適合在普通光學顯微鏡下觀察，在符合病理學家對細胞病理形態學診斷要求的前提下，可以同時觀察一個或者多個特定生物標記物在同一細胞上的表達。本發明還涉及所述方法得到的細胞和載有所述細胞的病理切片。

背景技術

細胞病理學主要是根據細胞內異常狀況，研究疾病發生的原因、發病原理，以及疾病發生過程中，細胞的生理功能發生改變的規律，從而提出診斷和防治疾病的依據。臨床樣本涵蓋脫落細胞學、細針吸取細胞學、血液循環腫瘤細胞，其他細胞學（手術中的細胞學，骨髓、外周血細胞學，艾滋病細胞學等）。

早期的細胞病理學常規染色方法包括巴氏（Papanicolaou）、瑞氏-吉姆薩（Wright-Giemsa）等。目前最常用的是迪夫快速染色 （Diff-Quik）,其染液是采用世界衛生組織(WHO)推薦的快速染色方法而配制，與瑞氏-吉姆薩類似都是利用巴氏技術原理改良而來的。染色結果可以顯示細胞膜的特點，比如細胞皺褶；細胞質的粘液、脂肪顆粒、神經內分泌顆粒；細胞核的特點，包括細胞核的形態和大小、核仁的數目和形狀、染色體數目、染色質的質地，為細胞病理學家提供細胞形態學診斷信息。

細胞病理學的工作流程是先對細胞樣本制作病理涂片，進行常規染色，然后再進行細胞病理形態學診斷。隨著科學和技術的發展，細胞病理學家需要對細胞的蛋白或者核酸標志物進行免疫組化染色或者核酸顯色原位雜交染色，來進一步幫助診斷、判斷預后，和選擇藥物。但是，目前細胞病理學樣本經過常規形態學染色以后，無法再進一步進行細胞免疫組化或者核酸顯色原位雜交染色。這個臨床痛點是由以下原因造成的：

1）常規細胞病理學染色方法的染料會影響第一抗體或者第一探針和相關靶點的結合，因此需要清洗這些染色，才能更好地實現生物標記物的免疫組化染色。2）清洗后，常常需要與常規相比更高濃度的蛋白抗體或者核酸探針來進行染色，容易造成假陽性，誤導臨床診斷、治療和判斷預后。3）細胞涂片在染色過程中處在一個開放的環境，在染色過程中染色液體要不斷更換，沖洗，隨后丟棄。隨著對染色液和沖洗液的不斷更換和丟棄，會造成病理玻片上細胞樣本脫落而丟失，影響結果的準確性。4）即使個別情況下不需要去除常規染色，免疫組化染色或者顯色原位雜交染色過程可導致常規染料脫落，導致常規染色下的細胞形態學特點觀察效果不佳。5）通常的免疫組織化學或者核酸顯色原位雜交染色，為了提高染色的敏感性，會盡量提升化學染色的過程，會造成顯色產物過度集中堆積而覆蓋細胞，影響觀察形態學的診斷。

盡管免疫組化和顯色原位雜交染色成為組織病理學上已經成為不可或缺的輔助染色，因為以上的技術阻礙，細胞病理學上免疫組化和顯色原位雜交染色的應用還是空白，沒有廣泛臨床應用。因此，本領域還需要新的染色方法以克服上述現有技術的缺點。

發明內容

本發明涉及細胞病理學領域的一種細胞多重染色方法，可以在同一個樣本細胞上，同時顯示詳細的可診斷的細胞形態學特點，和一個或者多個特定生物標記物的表達信息。染色結果適合在普通光學顯微鏡下觀察，在符合病理學家對細胞病理形態學診斷要求的前提下，可以同時觀察一個或者多個特定生物標志物在同一細胞上的表達。染色過程不丟失細胞，適合少量細胞樣本的多重染色。