[發明專利]一種細胞病理學樣本的多重染色制片方法

有效

• 申請號: 202010468262.6
• 申請日: 2020-05-28
• 公開（公告）號: CN112113821B
• 公開（公告）日: 2021-09-03
• 發明（設計）人: 楚文江;王劍
• 申請（專利權）人: 王劍
• 主分類號: G01N1/30
• 分類號: G01N1/30
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;李唐

1.對細胞樣本進行免疫組化染色和/或核酸顯色原位雜交染色以及可用來病理學診斷的細胞形態學染色的多重染色方法，包括：

a) 在容器中制備細胞樣本的細胞懸液；

b) 在所述容器中的所述細胞懸液中，對所述細胞進行免疫組化染色和/或核酸顯色原位雜交染色，包括：

i) 在所述細胞懸液中加入特異性結合所述細胞上的抗原和/或核酸標志物的第一抗體和/或第一核酸探針，完成所述第一抗體和/或第一核酸探針與所述抗原和/或核酸標志物的特異性結合；

ii) 去除未結合的所述第一抗體和/或第一核酸探針，然后重新制備細胞懸液，

iii) 在步驟ii)制備的細胞懸液中加入綴合了顯色酶的第二抗體和/或顯色酶標記的第二核酸探針，使其特異性結合第一抗體和/或第一核酸探針；

iv) 去除未結合的所述綴合了顯色酶的第二抗體和/或顯色酶標記的第二核酸探針，然后重新制備細胞懸液，

v) 在步驟iv)制備的細胞懸液中加入顯色底物進行顯色，在顯色過程中，不斷震蕩懸浮在液體中的細胞，使催化產生的顯色沉淀產物均勻散開而避免集中堆積；以及

vi) 去除多余的顯色底物，然后重新制備細胞懸液；以及

c) 在所述容器中對所述細胞進行可用來病理診斷的細胞形態學染色，然后將多重染色的細胞涂布到病理玻片上；或者，將經過免疫組化染色和/或核酸顯色原位雜交染色的細胞涂布到病理玻片上，進行可用來病理診斷的形態學染色。

2.權利要求1所述的方法，其中步驟ii)、iv)和vi)中去除未結合的所述第一抗體和/或第一核酸探針、去除未結合的所述綴合了顯色酶的第二抗體和/或顯色酶標記的第二核酸探針和去除多余的顯色底物通過以下步驟：

i)清洗細胞；

ii)離心沉淀細胞；和

iii)丟棄上清液。

3.權利要求1或2所述的方法，其中所述可用來病理學診斷的細胞形態學染色選自Diff-Quik染色、巴氏（Papanicolaou）、瑞氏-吉姆薩 （Wright-Giemsa）染色，和HE染色。

4.權利要求3所述的方法，其中所述可用來病理學診斷的細胞形態學染色是Diff-Quik染色。

5.權利要求1或2所述的方法，其中所述細胞樣本選自細胞病理學針吸活檢穿刺的樣本、血液循環腫瘤細胞樣本、宮頸刮片細胞樣本，和尿液脫落細胞樣本，或者所述細胞樣本是通過稀釋來自患者的樣本的細胞沉淀物而得到的，所述來自患者的樣本是體液。

6.權利要求1或2所述的方法，其中所述細胞樣本是通過稀釋來自患者的樣本的細胞沉淀物而得到的，所述來自患者的樣本選自血液、血清、血漿、尿、唾液、汗液、粘液、淚液、淋巴液、羊水、間質液、胸水、腹水、肺灌洗液、腦脊液、糞便和組織樣本。

7.權利要求1或2所述的方法，其中所述細胞樣本是通過稀釋來自患者的樣本的細胞沉淀物而得到的，所述來自患者的樣本選自痰和精液。

8.權利要求1或2所述的方法，其中所述第一抗體和/或第一探針是多重抗體和/或探針組合，分別染色細胞膜、細胞質，和/或細胞核。

9.經過多重染色的離體細胞，其中所述細胞是腫瘤細胞，其同時具備可用來病理診斷的形態學染色和腫瘤標志物染色，并且其是通過權利要求1-8的任一項的方法得到的。

10.權利要求9的離體細胞，其中所述細胞來自選自下組的細胞樣本：細胞病理學針吸活檢穿刺的樣本、血液循環腫瘤細胞樣本、宮頸刮片細胞樣本、尿液脫落細胞樣本和體液。

11.權利要求9的離體細胞，其中所述細胞來自選自下組的細胞樣本：血液、血清、血漿、尿、唾液、汗液、粘液、淚液、淋巴液、羊水、間質液、胸水、腹水、肺灌洗液、腦脊液、糞便和組織樣本。