[發明專利]一種嵌合抗原受體T淋巴細胞及其在制備治療實體腫瘤的產品中的應用

有效

• 申請號: 202010466592.1
• 申請日: 2020-05-28
• 公開（公告）號: CN111875708B
• 公開（公告）日: 2021-05-04
• 發明（設計）人: 朱建高;楊文君
• 申請（專利權）人: 浙江康佰裕生物科技有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N5/10;C12N15/867;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

本發明公開了一種嵌合抗原受體T淋巴細胞及其在制備治療實體腫瘤的產品中的應用。所述嵌合抗原受體T淋巴細胞中的嵌合抗原受體依次包括人CD8先導肽、抗Siglec?15單鏈抗體、人CD8鉸鏈跨膜區、人4?1BB胞內區、人CD3ζ胞內區、自切割肽、CSF2Ra信號肽、EGFRt蛋白、自切割肽和人CD27。通過實驗證明：本發明的嵌合抗原受體T淋巴細胞高表達IFNγ和CD107a，對Siglec?15陽性的腫瘤細胞具強烈的殺傷功能，在效靶比是1比1的情況下，殺傷效率超過80％。腫瘤移植模型實驗表明：本發明的嵌合抗原受體T淋巴細胞在動物體內對Siglec?15陽性的腫瘤細胞同樣具有強烈的殺傷功能。

技術領域

本發明涉及生物醫藥技術領域，具體涉及一種嵌合抗原受體T淋巴細胞及其在制備治療實體腫瘤的產品中的應用，特別涉及一種Siglec-15-CAR-CD27嵌合抗原受體基因修飾的T淋巴細胞及其在制備治療實體腫瘤的產品中的應用。

背景技術

隨著T淋巴細胞腫瘤免疫應答機制的研究日益受到重視，嵌合抗原受體T(CAR-T)細胞治療正在成為腫瘤免疫治療領域的一個新的免疫治療策略。由于T細胞對靶細胞的識別特異性依賴于T淋巴細胞受體(T Cell Receptor，TCR)，因此將針對腫瘤細胞相關抗原的單鏈抗體片段(scFv)與T淋巴細胞受體的CD3ζ或FcεRIγ等胞內信號激活基序融合成嵌合抗原受體(Chimeric antigen receptor，CAR)，并將其通過如逆轉錄病毒感染等方式基因修飾在T淋巴細胞表面，這種CAR-T淋巴細胞能夠以主要組織相容性復合物(MajorHistocompatibility Complex，MHC)非限制性方式選擇性地將T淋巴細胞定向到腫瘤細胞并特異性地殺傷腫瘤。

CAR-T細胞介導的免疫反應是其清除腫瘤細胞的主要手段。在正常的免疫反應中，抗原特異性T細胞需要至少兩個信號的刺激才能進行增殖并對抗原產生免疫應答。第一信號，抗原結合的T細胞受體(TCR)和CD3胞內免疫受體酪氨酸激活基序(ITAM)轉導信號(CD3ζ)；第二信號，協同刺激信號，由T細胞與抗原提呈細胞(APC)或其它細胞表面的共刺激分子對所介導，包括CD28、CD137、CD134和CD27等表面受體。CAR-T設計考慮到了T細胞激活的免疫學特性，CAR的結構包含胞外結合區，跨膜區和胞內信號區。通常胞外區包含能夠識別腫瘤相關抗原的scFv，跨膜區采用CD8、CD28等分子的跨膜區，胞內信號區采用免疫受體酪氨酸活化基序(ITAM)CD3ζ及共刺激信號分子CD28、CD137、CD134等的胞內信號區。

胞內信號區僅包含ITAM的為第一代CAR-T淋巴細胞，其中嵌合抗原受體各部分按如下形式連接：scFv-TM-ITAM。該種CAR-T可以激發抗腫瘤的細胞毒性效應，但是缺少足夠的第二信號刺激，并且在體內不能激發持久的抗腫瘤效應。

隨后發展的第二代CAR-T淋巴細胞加入了CD28或CD137(又名4-1BB)的胞內信號區，其中嵌合抗原受體各部分按如下形式連接：scFv-TM-CD28-ITAM或scFv-TM-CD137-ITAM。胞內信號區發生的B7/CD28或4-1BBL/CD137共刺激作用能夠引起T淋巴細胞的持續增殖，從而提高T細胞的細胞毒性、增殖活性，維持T細胞應答，延長T細胞存活時間等。第二代CAR在隨后的臨床試驗中產生了意想不到的效果，從2010年起基于第二代CAR的臨床報道屢次引發震動，特別是對于復發性、難治性的急性淋巴細胞白血病(ALL)病人，其完全緩解率高達90％以上。

第三代CAR-T淋巴細胞，則是同時將兩種不同的胞內信號域串聯表達，使細胞因子持續分泌，T細胞殺傷腫瘤細胞的能力顯著增強，進一步提高了CAR-T在體內的存活周期和其抗腫瘤效果。例如，最典型的就是賓夕法尼亞大學的Carl June在CD28胞內共刺激信號域后面串聯表達CD137(4-1BB)或CD134(OX40)的共刺激信號域。其中嵌合抗原受體各部分按如下形式連接：scFv-TM-CD28-CD137-ITAM或scFv-TM-CD28-CD134-ITAM。