[發明專利]表達非洲豬瘟病毒p34基因的重組腺病毒載體、重組腺病毒、方法及應用在審
| 申請號： | 202010466094.7 | 申請日： | 2020-05-28 |
| 公開（公告）號： | CN111549066A | 公開（公告）日： | 2020-08-18 |
| 發明（設計）人： | 陳平;張利娟;張婷婷;李娜;楊文清;沈亞釹;王書芳;李楠 | 申請（專利權）人： | 嘉銘（固安）生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/861 | 分類號： | C12N15/861;C12N15/34;C12N15/66;C12N7/01;A61K39/12;A61P31/20 |
| 代理公司： | 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283 | 代理人： | 向慶寧 |
| 地址： | 065500 河北省廊坊市固安*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 表達 非洲 豬瘟 病毒 p34 基因 重組 載體 方法 應用 | ||
1.一種表達非洲豬瘟病毒p34基因的重組腺病毒載體，其特征在于，包括腺病毒骨架載體和插入腺病毒骨架載體多克隆位點的非洲豬瘟病毒p34基因，其中，所述p34基因的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。
2.根據權利要求1所述的重組腺病毒載體，其特征在于，所述腺病毒骨架載體為pAd5。
3.一種如權利要求1或2所述的表達非洲豬瘟病毒p34基因的重組腺病毒載體的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)采用如SEQ ID No.2和SEQ ID No.3所述的引物擴增獲得非洲豬瘟病毒p34基因片段，其中，所述非洲豬瘟病毒p34基因片段的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；
2)將擴增獲得的非洲豬瘟病毒p34基因片段連接到穿梭質粒中，將所得連接產物導入大腸桿菌中進行擴增，提取獲得重組穿梭質粒；
3)將步驟2)提取獲得的重組穿梭質粒進行單酶切，獲得線性化重組穿梭質粒；將腺病毒骨架載體進行單酶切，獲得線性化腺病毒骨架載體；將所得線性化重組穿梭質粒和線性化腺病毒骨架載體共轉化大腸桿菌，進行同源重組，獲得所述重組腺病毒載體。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟2)中，所述穿梭質粒為pS5E1，所述大腸桿菌為DH5α大腸桿菌。
5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中，所述腺病毒骨架載體為pAd5，所述大腸桿菌為BJ5183大腸桿菌。
6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟3)中，在進行同源重組之前，還包括對所述線性化重組穿梭質粒和線性化腺病毒骨架載體進行去磷酸化處理的步驟。
7.一種表達非洲豬瘟病毒p34基因的重組腺病毒，其特征在于，所述重組腺病毒由權利要求1或2所述的重組腺病毒載體轉染哺乳動物細胞所獲得，所述重組腺病毒含有非洲豬瘟病毒p34基因。
8.一種如權利要求7所述的表達非洲豬瘟病毒p34基因的重組腺病毒的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
將權利要求1或2所述的重組腺病毒載體線性化后轉染哺乳動物細胞，進行重組腺病毒的包裝和擴增，得到所述重組腺病毒。
9.根據權利要求8所述的方法，其特征在于，所述哺乳動物細胞為HEK293細胞。
10.如權利要求1或2所述的重組腺病毒載體或權利要求7所述的重組腺病毒在制備非洲豬瘟病毒疫苗中的應用。
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