[發(fā)明專利]一種檢測新型冠狀病毒的抗體及檢測試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010463547.0
• 申請(qǐng)日: 2020-05-27
• 公開（公告）號(hào): CN112898415B
• 公開（公告）日: 2021-12-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張黎;高行素;鄭濱洋;潘紅星;唐蓉;胡家壘;賈斯月;儲(chǔ)凱;朱鳳才
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江蘇省疾病預(yù)防控制中心（江蘇省公共衛(wèi)生研究院）
• 主分類號(hào): C07K16/10
• 分類號(hào): C07K16/10;C12N15/13;G01N33/569
• 代理公司: 北京預(yù)立生科知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11736
• 代理人: 朱萍;孟祥斌

本發(fā)明公開了一種檢測新型冠狀病毒的抗體及檢測試劑盒。本發(fā)明還涉及編碼抗體的核酸分子以及使用這些抗體進(jìn)行診斷的方法。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于細(xì)胞免疫學(xué)、分子生物學(xué)領(lǐng)域，涉及一種檢測新型冠狀病毒的抗體及檢測試劑盒。

背景技術(shù)

國際病毒分類委員會(huì)將新型冠狀病毒命名為SARS-CoV-2，世界衛(wèi)生組織將感染此病毒引起的肺炎稱為COVID-19。此病毒傳染性強(qiáng)，傳播途徑廣。該病毒能迅速適應(yīng)人體環(huán)境，感染后在潛伏期即具有傳播能力，同時(shí)還有一些無癥狀感染者報(bào)道，甚至在多種動(dòng)物體內(nèi)也檢測到病毒核酸。這些因素使得對(duì)該病毒的防控變的非常復(fù)雜，而且目前沒有有效治療藥物及疫苗上市。

SARS-CoV-2屬于冠狀病毒屬，為單股正鏈RNA病毒，大小約30kb，與SARS-CoV相似性為79％，與蝙蝠體內(nèi)分離的冠狀病毒(Coronavirus，CoV)相似性最高約88％。SARS-CoV-2具有典型的冠狀病毒特征，病毒包膜上有典型的棘突，形似日冕。核衣殼為螺旋對(duì)稱型，主要結(jié)構(gòu)蛋白是核衣殼蛋白(Nucleocapsid protein,NP)，NP全長420個(gè)氨基酸。NP在病毒結(jié)構(gòu)蛋白中含量最多，在宿主感染早期大量表達(dá)，且免疫原性較強(qiáng)，能引起宿主強(qiáng)烈的免疫應(yīng)答。因此，NP可作為SARS-CoV-2感染血清學(xué)診斷的主要靶標(biāo)抗原。

由于特異性治療藥物及有效疫苗尚未研發(fā)成功，早期診斷成為防控疫情重要的措施，早期核酸診斷及臨床診斷為確診重要依據(jù)。雖然核酸診斷速度快，受采樣的質(zhì)量的影響大，存在假陽性和假陰性，影響防控措施的落實(shí)。部分無癥狀感染者在病程晚期核酸檢測也呈陰性，單憑核酸檢測很容易出現(xiàn)漏診。血清學(xué)診斷是檢測病原感染后機(jī)體的免疫反應(yīng)，持續(xù)時(shí)間長，免疫反應(yīng)穩(wěn)定，且免疫反應(yīng)隨著病程進(jìn)展呈動(dòng)態(tài)變化趨勢。因此，血清學(xué)診斷同樣也是早期診斷和感染現(xiàn)狀評(píng)價(jià)的的重要手段。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供了抗體或其抗原結(jié)合片段，它們能特異地結(jié)合新型冠狀病毒NP蛋白。這些抗體是人源單克隆杭體。

根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了能與新型冠狀病毒NP蛋白特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含含有SEQ ID NO.1-3所示的序列的CDR區(qū)的重鏈可變區(qū)。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，重鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列。

本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段進(jìn)一步包含含有SEQ ID NO.5-7所示的序列的CDR區(qū)的輕鏈可變區(qū)。

在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，輕鏈可變區(qū)包含SEQ ID NO.8所示的氨基酸序列。

本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段可以是免疫球蛋白G(IgG)、IgM、IgE、IgA或IgD分子，在一種優(yōu)選的實(shí)施方案中，這種人源抗體是IgG。可能是IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4亞型。這種抗體或其抗原結(jié)合片段可以從Fab片段、F(ab’)2片段、Fv片段、單鏈抗體或嵌合抗體衍生而來。

在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的抗體或其抗原結(jié)合片段可以作為融合蛋白的一部分。

根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含前面所述的抗體或其抗原結(jié)合片段編碼序列的多核苷酸分子，特別是提供了編碼重鏈和輕鏈可變區(qū)、編碼重鏈和輕鏈CDR1到CDR3連續(xù)的氨基酸序列以及編碼單獨(dú)CDRs的核苷酸序列。

所述核酸分子包括SEQ ID NO.17和18所示的序列。

根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種表達(dá)載體，其包含前面所述的多核苷酸分子。

進(jìn)一步，所述表達(dá)載體還包含與前面所述的多核苷酸分子可操作性連接的表達(dá)控制序列。

根據(jù)本發(fā)明的又一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種宿主細(xì)胞，其被前面所述的多核苷酸分子或前面所述的表達(dá)載體所轉(zhuǎn)化。