[發明專利]一種豬流行性腹瀉病毒重組疫苗株及其制備方法在審
| 申請號： | 202010462857.0 | 申請日： | 2020-05-27 |
| 公開（公告）號： | CN111607572A | 公開（公告）日： | 2020-09-01 |
| 發明（設計）人： | 陳冰清;李震;董世娟;于瑞嵩;司伏生;謝春芳 | 申請（專利權）人： | 上海市農業科學院 |
| 主分類號： | C12N7/01 | 分類號： | C12N7/01;C12N15/50;C12N15/63;C12R1/93 |
| 代理公司： | 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246 | 代理人： | 劉妮 |
| 地址： | 201106 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 種豬 流行性 腹瀉 病毒 重組 疫苗 及其 制備 方法 | ||
1.一種豬流行性腹瀉病毒重組疫苗株，其特征在于，是以PED經典毒株DR13為骨架，將抗原基因S基因替換成PED流行毒株S基因。
2.根據權利要求1所述的一種豬流行性腹瀉病毒重組疫苗株，其特征在于，所述的PED流行毒株S基因來源于美國流行毒株KF650375。
3.權利要求2所述的PED流行毒株S基因的制備方法，其特征在于，根據NCBI中KF650375的S基因的序列，設計并合成引物，通過引物小片段PCR融合，從一級片段逐級放大至四級片段，合成出PED流行毒株S基因。
4.根據權利要求3所述的PED流行毒株S基因的制備方法，其特征在于，所述的引物具體如SEQ ID NO.19～102所示。
5.權利要求1所述的重組疫苗株的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
1)以PED經典毒株DR13基因為模板，設計引物對B；
2)進行PCR擴增得到p-PEDV-ΔSDR13片段；
3)將PED流行毒株S基因用帶有同源臂的引物對C擴增，在同源重組酶的作用下，PED流行毒株S基因就定向與p-PEDV-ΔSDR13片段連接，形成重組的轉移載體。
6.根據權利要求5所述的重組疫苗株的制備方法，其特征在于，進一步的，步驟(1)中引物對B為：
上游引物：ttttgaaaaggtccacgtgcagtga；
下游引物：tcatttgtttacgttgaccaaatga。
7.根據權利要求5所述的重組疫苗株的制備方法，其特征在于，進一步的，步驟(3)中引物對C為：
上游引物：ctaatcatttggtcaacgtaaacaaatgaagtctttaacctactctggt；
下游引物：gtgtattgaaaaagtccaagaaacatcactgcacgtggaccttttcaaaa。
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