[發(fā)明專(zhuān)利]一種可應(yīng)用于臨床的自體胸腹水上清液大規(guī)模培養(yǎng)胸腹水來(lái)源的TIL細(xì)胞的方法及其用途

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010462710.1
• 申請(qǐng)日: 2020-05-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111500536A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 呂成偉;吳炳義;范曉樂(lè);李水珍;朱澤佳;王博
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 廣州香雪南方精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)科技有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12N5/0783
• 分類(lèi)號(hào): C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 廣州幫專(zhuān)高智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 44674
• 代理人: 胡洋

本發(fā)明公開(kāi)了一種可應(yīng)用于臨床的自體胸腹水上清液大規(guī)模擴(kuò)增胸腹水來(lái)源的TIL細(xì)胞的方法，包括：TIL細(xì)胞來(lái)源、培養(yǎng)液，以及增殖培養(yǎng)工藝、技術(shù)要求，滿(mǎn)足臨床安全性和數(shù)量有效性的要求和倫理學(xué)的要求。根據(jù)《權(quán)利要求書(shū)》(1)、(2)、(3)所述，TIL種子細(xì)胞來(lái)源和培養(yǎng)基均來(lái)自于患者自體，其特征在于：1)所有原材料均來(lái)自于患者擬廢棄的胸腹水，TIL細(xì)胞培養(yǎng)免除了對(duì)同種異體AB血清的依賴(lài)，符合安全和倫理要求、簡(jiǎn)便而且經(jīng)濟(jì)。根據(jù)權(quán)利書(shū)要求(4)所述，根據(jù)本發(fā)明的培養(yǎng)方法，達(dá)到了大規(guī)模增殖TIL細(xì)胞的目的，經(jīng)數(shù)量檢測(cè)和純度檢測(cè)達(dá)到了臨床應(yīng)用的要求。屬于一種突破性創(chuàng)新方法，填補(bǔ)了國(guó)內(nèi)該領(lǐng)域的空白，達(dá)到了國(guó)際先進(jìn)水平。

一、技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種TIL細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)方法，尤其涉及一種來(lái)源于自體的培養(yǎng)液

二、背景技術(shù)

腫瘤是一種古老的疾病，因其發(fā)病機(jī)理不明確，病人死亡率高，治療極其困難，嚴(yán)重威脅著人民群眾 的健康，亟需探尋創(chuàng)新性的治療方案。目前癌癥持續(xù)高發(fā)，我國(guó)人口基數(shù)大，又面臨社會(huì)老齡化，癌癥存 量增量持續(xù)擴(kuò)大。

2019年1月，國(guó)家癌癥中心發(fā)布了最新一期的全國(guó)癌癥統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)。報(bào)告顯示，2015年全國(guó)惡性腫瘤 發(fā)病約392.9萬(wàn)人，較2014年的380.4萬(wàn)增加12.5萬(wàn)，增長(zhǎng)率為3.2％；這意味著，平均每天超過(guò)1萬(wàn)人 被確診為癌癥，每分鐘有7.5人被確診為癌癥。

隨著科學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，科研人員發(fā)現(xiàn)免疫細(xì)胞對(duì)腫瘤治療的有效性起著非常重要的作用。到目前 為止，臨床科研人員拓展了傳統(tǒng)治療腫瘤的3大主流方法：手術(shù)、放療和化療，積極運(yùn)用介入治療、中醫(yī) 藥治療、免疫治療等手段。其中腫瘤免疫治療由于其卓越的創(chuàng)新性和療效性，被Science雜志評(píng)為2013 年度十大科學(xué)突破之首。2018年的諾貝爾生理學(xué)獎(jiǎng)和醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)授予兩位腫瘤免疫學(xué)家，使我們清楚的認(rèn)識(shí)到 免疫細(xì)胞療法對(duì)于癌癥的治療取得的革命性的突破。

免疫治療通過(guò)激活人體本身的免疫系統(tǒng)，依靠自身的免疫機(jī)能殺滅癌細(xì)胞。目前已在多種腫瘤如黑色 素瘤，非小細(xì)胞肺癌、腎癌和前列腺癌等實(shí)體瘤的治療中展示出了強(qiáng)大的抗腫瘤活性。隨著腫瘤免疫治療 科研成果的井噴，其在腫瘤治療中的地位和群眾認(rèn)可度與日俱增，越來(lái)越受到重視，腫瘤治療已經(jīng)進(jìn)入了 腫瘤免疫細(xì)胞治療的新時(shí)代，并將成為惡性腫瘤患者的新選擇。

TIL細(xì)胞是抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞，也是一種重要的免疫療法應(yīng)用細(xì)胞，具有高效、特異、副作用小等優(yōu)點(diǎn)。 1986年Rosenberg研究組首先報(bào)道了腫瘤浸潤(rùn)淋巴細(xì)胞(TIL)，這些浸潤(rùn)的淋巴細(xì)胞被認(rèn)為是一種機(jī)體對(duì) 腫瘤細(xì)胞特異性免疫反應(yīng)。TIL細(xì)胞的抗腫瘤效果是LAK的50—100倍，如把TIL細(xì)胞回輸?shù)襟w內(nèi)血液及 腫瘤中可以存留達(dá)二月之久，2019年5月，F(xiàn)DA授予TIL療法LN-145突破性療法認(rèn)定(BTD)，用于治療 在接受化療后復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移性或持久性宮頸癌患者。因此它有著巨大的潛在治療價(jià)值。

TIL細(xì)胞的臨床應(yīng)用實(shí)踐中還有以下四個(gè)需求：第一、需要安全無(wú)創(chuàng)的TIL細(xì)胞來(lái)源；第二、需要滿(mǎn) 足臨床對(duì)安全性及倫理學(xué)要求；第三、TIL細(xì)胞培養(yǎng)需要免除對(duì)同種異體AB血清的依賴(lài)；第四、需要大規(guī) 模擴(kuò)增技術(shù)滿(mǎn)足臨床對(duì)細(xì)胞數(shù)量有效性的要求。

三、發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于設(shè)計(jì)一種用腫瘤患者自體胸腹水上清液大規(guī)模培養(yǎng)胸腹水來(lái)源的TIL細(xì)胞的方法。 首先，解決臨床實(shí)踐中依賴(lài)同種異體AB血清，較難符合安全性和倫理學(xué)要求的問(wèn)題。其次，解決臨床需 要安全無(wú)創(chuàng)的TIL細(xì)胞來(lái)源。最后，解決臨床對(duì)細(xì)胞數(shù)量的要求。

本發(fā)明的技術(shù)方案：一種大規(guī)模增殖TIL細(xì)胞的技術(shù)。其特征在于：胸腹水來(lái)自需要治療的患者自體， 培養(yǎng)液也來(lái)自于患者自體胸腹水上清液配制，用于培養(yǎng)TIL細(xì)胞的PBMC同樣來(lái)自于患者胸腹水提取物。 最后，應(yīng)用于需要TIL細(xì)胞免疫治療的具有胸腹腔轉(zhuǎn)移的腫瘤患者自身。