[發明專利]一種可應用于臨床的自體胸腹水上清液大規模培養胸腹水來源的TIL細胞的方法及其用途

在審

• 申請號: 202010462710.1
• 申請日: 2020-05-27
• 公開（公告）號: CN111500536A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 呂成偉;吳炳義;范曉樂;李水珍;朱澤佳;王博
• 申請（專利權）人: 廣州香雪南方精準醫學科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0783
• 分類號: C12N5/0783;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 廣州幫專高智知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 44674
• 代理人: 胡洋

1.一種用自體胸腹水上清液大規模培養胸腹水來源的TIL細胞的方法及其用途，其特征在于，步驟如下：

(1)自體胸腹水來自腫瘤患者治療過程中的擬廢棄物。中晚期腫瘤患者癌性胸腹腔轉移出現惡液質，癌性胸腹水比例多，因為臨床尚無有效控制癌性胸腹腔轉移進展的方法，所以癌性胸腹水常規檢查后均被廢棄，但患者胸腹水中常含有癌細胞及大量免疫細胞，經患者同意，收集患者擬廢棄的胸腹水。

(2)將步驟(1)得到的胸腹水，進行離心收集上清液,配制含IL-2，CD3單抗的培養基，該上清液培養基可替代人AB血清用于培養TIL細胞，不但可以免除對同種異體AB血清的依賴，而且保障了臨床對安全性及倫理學要求。

(3)將步驟(1)得到的胸腹水，進行離心收集沉淀TIL細胞，轉移至于50ml無菌管，生理鹽水混勻洗滌一次，Ficoll常規分離白細胞，取得種子細胞。

(4)將步驟(3)得到的種子細胞與步驟(2)中得到的胸腹水上清液作為原料備用。以少量TIL細胞(約5百萬左右即可)為種子，其余自體淋巴細胞經輻照后作為滋養細胞，混合培養(飽和濕度、37℃、5％CO₂)，第5天半量換液，第7天轉入培養袋連續培養，隔天適時補充培養基，經約16-20天連續培養可大規模擴增出臨床需要的細胞數量(約百億以上TIL細胞)，細胞純度達到了臨床應用的需求，經流式檢測CD3⁺T細胞比例可達95％以上，達到臨床應用TIL細胞對質量安全性和細胞數量有效性的要求。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)的胸腹水來自需要治療的患者自體；步驟(2)的TIL細胞培養液來自需要治療的患者自體胸腹水上清液。(3)用于培養TIL細胞的PBMC來自需要治療的患者胸腹水提取物；步驟(4)的培養方法：經流式細胞儀記錄培養過程中的細胞演化和純度檢測，最終可應用于需要自體TIL細胞免疫治療的患者。