[發(fā)明專利]一種利用混合溶劑減少乙基雙酮11a羥化過(guò)程中雜質(zhì)的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 202010460194.9 | 申請(qǐng)日： | 2020-05-27 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN111593086B | 公開（公告）日： | 2023-05-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 陳海林;蔡嘯;宋盟軍;應(yīng)娟;狄飛飛;汪洋;胡甜 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 湖北葛店人福藥業(yè)有限責(zé)任公司 |
| 主分類號(hào)： | C12P33/10 | 分類號(hào)： | C12P33/10;C12N1/14;C12R1/645 |
| 代理公司： | 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102 | 代理人： | 喬宇 |
| 地址： | 436070 湖北省鄂州市葛店*** | 國(guó)省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 混合 溶劑 減少 乙基 11 過(guò)程 雜質(zhì) 方法 | ||
本發(fā)明涉及一種利用混合溶劑減少乙基雙酮11α羥化過(guò)程中雜質(zhì)的方法，包括如下步驟：將綠僵菌菌種培養(yǎng)獲得綠僵菌菌體，收集菌體；收集菌體后投料轉(zhuǎn)化：將底物DL?18?甲基?4?雌烯?3,17?二酮采用由DMF和DMSO組成的混合溶劑溶解，將收集的菌體投入到底物中，將底物轉(zhuǎn)化為11α?羥基?18?甲基雌甾?4?烯?3,17?二酮。本發(fā)明方法可明顯減少乙基雙酮生物羥化產(chǎn)物中雜質(zhì)的生成，尤其是10α?OH乙基雙酮和6β?乙基雙酮的生成，提升了轉(zhuǎn)化率，并簡(jiǎn)化了后處理工藝，提高了平均收率。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種利用混合溶劑減少乙基雙酮11α羥化過(guò)程中雜質(zhì)的方法。
背景技術(shù)
現(xiàn)有技術(shù)公開了甾體合成中生物轉(zhuǎn)化的應(yīng)用，主要包括羥基化、邊鏈降解、雙鍵還原等。相比于化學(xué)法，生物轉(zhuǎn)化具有反應(yīng)溫和、污染少、收率高等特點(diǎn)。因此在甾體合成中，通常利用兩者的優(yōu)勢(shì)配合使用。盡管微生物轉(zhuǎn)化具有獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但工業(yè)應(yīng)用中常受到實(shí)際困難的制約，其中，去氧孕烯合成過(guò)程中，乙基雙酮的11α羥化是整個(gè)合成工藝中關(guān)鍵的一步，目前工業(yè)生產(chǎn)中存在產(chǎn)率低、雜質(zhì)多的情況。因此降低雜質(zhì)的含量，提高轉(zhuǎn)化率是目前面臨的主要問(wèn)題。
目前乙基雙酮的11α-羥化主要采用微生物細(xì)胞轉(zhuǎn)化的方法，文獻(xiàn)“11α-羥基化左旋乙基甾烯雙酮的生物催化”和“金龜子綠僵菌對(duì)甾體C11-α羥化反應(yīng)工藝的研究”都有所報(bào)道，所采用的菌株為赭曲霉和綠僵菌，轉(zhuǎn)化率在30-60％，收率在30％左右，轉(zhuǎn)化過(guò)程中雜質(zhì)點(diǎn)多，后處理一步用濃縮低溫重結(jié)晶方法，需要反復(fù)進(jìn)行4～5次去除雜質(zhì)，處理過(guò)程非常繁瑣困難。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種簡(jiǎn)單有效的利用混合溶劑減少乙基雙酮11α羥化過(guò)程中雜質(zhì)的方法。
為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)解決方案如下：
一種利用混合溶劑減少乙基雙酮11α羥化過(guò)程中雜質(zhì)的方法，包括如下步驟：
(1)將綠僵菌菌種培養(yǎng)獲得綠僵菌菌體，收集菌體；
(2)收集菌體后投料轉(zhuǎn)化：將底物DL-18-甲基-4-雌烯-3,17-二酮采用由DMF和DMSO組成的混合溶劑溶解，將收集的菌體投入到底物中，將底物轉(zhuǎn)化為11α-羥基-18-甲基雌甾-4-烯-3,17-二酮。
按上述方案，所述步驟(2)的轉(zhuǎn)化時(shí)間為24-50h。
按上述方案，所述步驟(2)的轉(zhuǎn)化溫度為20-40℃。
按上述方案，所述步驟(2)中，所用混合溶劑中按體積比計(jì)，DMF：DMSO＝1～20：1。
按上述方案，底物的溶解溫度在40-90℃，所用混合溶劑的量為底物投料量的1～20倍。
按上述方案，所述底物和菌體的質(zhì)量比例為1～10：1。
按上述方案，所述步驟(1)的培養(yǎng)方法為：
(1.1)將綠僵菌接種于馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)培養(yǎng)基培養(yǎng)；
(1.2)將上述菌種在無(wú)菌條件下接種于裝有液體培養(yǎng)基的搖瓶中，旋轉(zhuǎn)式搖床培養(yǎng)得種子液；
(1.3)培養(yǎng)好的搖瓶種子液轉(zhuǎn)接至小罐培養(yǎng)，獲得菌體。
按上述方案，步驟(1.1)中綠僵菌菌株培養(yǎng)溫度為25-32℃，培養(yǎng)時(shí)間3-10天。
按上述方案，所述的液體培養(yǎng)基為7.5～10g/L葡萄糖、7.5～10g/L黃豆粉、3.5～5g/L蠶蛹粉。
按上述方案，所述步驟(1.2)中，搖床培養(yǎng)轉(zhuǎn)速為100-200rpm，培養(yǎng)溫度為25-32℃，培養(yǎng)時(shí)間10-20h。
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