[發明專利]一種利用基于樹莓狀金基底的拉曼儀檢測鴨肉中殘留抗生素的方法

在審

• 申請號: 202010443990.1
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111426678A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 吳義平;劉藝;程正忠;唐學飛;劉洪林
• 申請（專利權）人: 合肥學院
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65;G01N1/28
• 代理公司: 合肥輝達知識產權代理事務所(普通合伙) 34165
• 代理人: 汪守勇

1.一種利用基于樹莓狀金基底的拉曼儀檢測鴨肉中殘留抗生素的方法，其特征在于，步驟如下：

1)、制備樹莓狀金溶膠：采用檸檬酸鈉還原硝酸銀得到銀納米溶膠作為種子溶液備用；以十六烷基三甲基溴化銨溶液、氯金酸、超純水，混勻后加入L-抗壞血酸溶液，搖勻，混合溶液由淡黃色變為無色作為生長液；將銀種子溶液加入生長液中反應，得到表面粗糙、部分空心的樹莓狀金溶膠；

2)、鴨肉預處理：剔膜鴨肉與乙酸乙酯混合渦旋、超聲、離心后取上清液，殘留物重復提取一次，將兩次提取得到的上清液合并，加入正己烷和二氯甲烷渦旋、離心，加熱至干，再用丙酮定容，最后用有機濾膜過濾得到鴨肉提取液；

3)、標準溶液的SERS檢測：將配制的待測呋喃西林、呋喃妥因標準液分別與樹莓狀金基底混合并滴加在硅片上，用激發光源為785nm的激光拉曼光譜儀進行掃描，分別得到呋喃西林和呋喃妥因標準溶液的SERS光譜圖；

4)、模擬液的SERS檢測：取呋喃西林、呋喃妥因分別加入至鴨肉提取液中，配制多組梯度濃度系列的呋喃西林鴨肉提取液、呋喃妥因鴨肉提取液作為模擬液，將模擬液與樹莓狀金溶膠基底混合并滴加在硅片上，用激發光源為785nm的激光拉曼光譜儀進行掃描，得到該系列濃度范圍的SERS光譜圖；然后分別與呋喃西林標準溶液、呋喃妥因標準溶液的SERS譜圖的主要特征峰進行對比指認，同時計算模擬液的SERS峰積分強度與呋喃西林、呋喃妥因濃度之間的線性關系，判斷檢測范圍和下限。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)鴨肉預處理步驟如下：

用分析天平稱取5g攪碎的剔膜鴨肉放入50mL離心管中，加入20mL乙酸乙酯渦旋1min，超聲振蕩10min，再用離心機4000r/min離心10min后取上清液，離心管中的殘留物按上述步驟再重復提取一次，將兩次提取得到的上清液合并；

取10mL提取液，加入15mL正己烷和15mL二氯甲烷渦旋2min，用離心機4000r/min離心10min，60℃水浴加熱至干，再用10mL丙酮定容，最后用0.45μm有機濾膜過濾得到鴨肉提取液。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟3)標準溶液的SERS檢測步驟如下：

用分析天平稱取10mg呋喃西林置于50mL燒杯中，加入丙酮用玻璃棒攪拌，取100mL容量瓶定容至100mg/L；用分析天平稱取10mg呋喃妥因置于50mL燒杯中，加入丙酮用玻璃棒攪拌，取100mL容量瓶定容至100mg/L；

分別取0.05mL呋喃西林標準溶液、呋喃妥因標準溶液于5mL試管中，向其中滴加0.05mL樹莓狀金溶膠振蕩、搖勻后滴加在硅片上，待混合液風干后再滴加0.05mL的樹莓狀金溶膠；用激發光源為785nm的激光拉曼光譜儀掃描呋喃西林、呋喃妥因標準溶液，掃描時間為5-20s，得到呋喃西林、呋喃妥因標準溶液的SERS光譜圖；

確定呋喃西林的特征峰為1551cm^-1，1473cm^-1，1343cm^-1，1234cm^-1，1174cm^-1，1015cm^-1，962cm^-1；

確定呋喃妥因的特征峰為1600cm^-1，1488cm^-1，1339cm^-1，1256cm^-1，1182cm^-1，1019cm^-1，968cm^-1。

4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，步驟4)模擬液的SERS檢測步驟如下：

用分析天平稱取10mg呋喃西林，取100mL容量瓶加入鴨肉提取液定容至100mg/L，用丙酮溶液將呋喃西林鴨肉提取液依次稀釋到10mg/L，5mg/L，1mg/L，0.1mg/L，0.05mg/L；用分析天平稱取10mg呋喃妥因，取100mL容量瓶加入鴨肉提取液定容至100mg/L，用丙酮溶液將呋喃妥因鴨肉提取液依次稀釋到10mg/L，5mg/L，1mg/L，0.1mg/L，0.05mg/L；

分別取0.05mL呋喃西林鴨肉提取液、呋喃妥因鴨肉提取液于5mL試管中，向其中滴加0.05mL樹莓狀金溶膠振蕩、搖勻后滴加在硅片上，待混合液風干后再滴加0.05mL的樹莓狀金溶膠；用激發光源為785nm的激光拉曼光譜儀進行掃描，掃描時間為5-20s；

掃描呋喃西林鴨肉提取液，得到濃度范圍在0.05～10mg/L呋喃西林鴨肉提取液的SERS光譜圖，比對呋喃西林鴨肉提取液的SERS光譜圖與呋喃西林標準溶液的SERS光譜圖的主要特征峰匹配，且在1343cm^-1處峰的SERS信號強度與鴨肉中呋喃西林的濃度存在良好的線性關系，檢測限為0.05mg/L；

掃描呋喃妥因鴨肉提取液，得到濃度范圍在0.05～10mg/L呋喃妥因鴨肉提取液的SERS光譜圖，比對呋喃妥因鴨肉提取液的SERS光譜圖與呋喃妥因標準溶液的SERS光譜圖的主要特征峰匹配，且在1600cm^-1處峰的SERS信號強度與鴨肉中呋喃妥因的濃度存在良好的線性關系，檢測限為0.05mg/L。