[發明專利]Bt Cry1類毒素廣譜檢測用雙價抗體及其基因序列與應用

在審

• 申請號: 202010440537.5
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111548414A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 董颯;管凌君;何康麗;馮建國
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C12N15/13;G01N33/68
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 杜春秋

1.Bt Cry1類毒素廣譜檢測用雙價抗體，其特征在于，該檢測用雙價抗體為V_L-V_L-2D3，所述雙價抗體V_L-V_L-2D3的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

2.如權利要求1所述雙價抗體V_L-V_L-2D3的基因序列。

3.根據權利要求2所述的基因序列，其特征在于，編碼所述雙價抗體V_L-V_L-2D3的基因序列如SEQ ID NO.1所示。

4.如權利要求1所述雙價抗體在Bt Cry1類毒素檢測中的應用，所述Bt Cry1類毒素為Cry1Aa，Cry1Ab，Cry1Ac，Cry1B，Cry1C，Cry1E和Cry1F。

5.根據權利要求4所述的應用，其特征在于，具體檢測方法如下：

步驟1、包被捕獲抗體—將抗Bt Cry1類毒素雙價抗體V_L-V_L-2D3采用PBS緩沖液稀釋到1.25 μg/mL后，加入到96孔酶標板中，100 μL/孔，于4 ℃條件下包被過夜；

步驟2、封閉—包被過夜之后，將孔內液體甩出，采用PBST溶液洗滌，隨后向孔中加入質量濃度為3%的 MPBS作為封閉液，200 μL/孔，然后將酶標板置于37 ℃培養箱中孵育2 h；

步驟3、加樣品—將酶標板采用PBST溶液洗滌之后，將預先溶解在CBS緩沖液中的BtCry1類毒素樣品加入到孔內，100 μL/孔，然后將酶標板置于37 ℃培養箱中孵育1 h；

步驟4、加檢測抗體—將酶標板采用PBST溶液洗滌之后，向孔內加入濃度為0.2 μg/mL的抗Bt Cry1類毒素多克隆抗體，100 μL/孔，隨后將酶標板置于37℃培養箱中孵育1 h；

步驟5、加酶標抗體—將酶標板采用PBST溶液洗滌之后，向孔內加入羊抗兔-HRP抗體，100 μL/孔，將酶標板置于37℃培養箱中孵育1 h；

步驟6、顯色—將酶標板采用PBST溶液洗滌之后，將TMB顯色液體系加入到酶標板微孔內，100 μL/孔，并將酶標板置于37 ℃培養箱中避光孵育15 min；

步驟7、檢測—將終止液加入到酶標板的微孔內，50 μL/孔，在酶標儀上于450 nm條件下測吸光度值。

6.根據權利要求5所述的應用，其特征在于，所述Bt Cry1類毒素樣品為Cry1Aa，Cry1Ab，Cry1Ac，Cry1B，Cry1C，Cry1E和Cry1F中的至少一種。