[發明專利]Bt Cry1類毒素廣譜檢測用雙價抗體及其基因序列與應用

在審

• 申請號: 202010440537.5
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111548414A
• 公開（公告）日: 2020-08-18
• 發明（設計）人: 董颯;管凌君;何康麗;馮建國
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C07K16/12
• 分類號: C07K16/12;C12N15/13;G01N33/68
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 杜春秋

本發明提出了Bt Cry1類毒素廣譜檢測用雙價抗體及其基因序列與應用，該雙價抗體為雙輕鏈抗體V_L?V_L?2D3，雙價抗體V_L?V_L?2D3的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本發明提供的雙價抗體與7種Cry1類毒素（Cry1Aa，Cry1Ab，Cry1Ac，Cry1B，Cry1C，Cry1E和Cry1F）均具有較好的結合活性，同時與Cry2A和Vip3毒素無交叉反應，可用于Bt Cry1類毒素的廣譜檢測，操作簡便，宜于推廣應用。

技術領域

本發明涉及Bt Cry1類毒素廣譜檢測用雙價抗體及其基因序列與應用，具體涉及一種來源于抗Bt Cry1類毒素單克隆細胞2D3基因的雙輕鏈抗體V_L-V_L-2D3及其基因序列和應用，屬于基因工程抗體和免疫學檢測技術領域。

背景技術

Bt Cry毒素是由蘇云金芽胞桿菌(Bacillus thuringiensis,簡稱Bt)在其孢子形成階段產生的一種殺蟲蛋白，對鱗翅目和鞘翅目昆蟲幼蟲有效。當它被敏感昆蟲幼蟲攝取后，在堿性環境及中腸蛋白酶的作用下裂解為65kDa大小的活性蛋白，并與存在于腸道細胞中的特定受體結合，導致孔隙的形成和中腸上皮細胞的裂解，最終導致幼蟲死亡。同時，因為哺乳動物體內缺乏Cry毒素蛋白的受體，所以Cry毒素被認為對人類和家畜是安全的。目前，Cry1類毒素基因被廣泛引入轉基因作物中，而轉基因抗蟲作物的不斷出現并得到大面積的推廣種植在產生經濟和社會效益的同時，其對生態安全的風險以及對人類和其它哺乳類動物的安全隱患也逐漸受到關注。目前，被應用的Cry1類毒素基因種類愈來愈多，帶來的政府安全監管和食品加工企業原料管控的技術制約愈來愈明顯，尤其是當針對一些轉基因食物中基因檢測不能取得滿意效果的時候，對毒素表達產物安全篩查檢測就顯的尤為迫切。

針對轉基因產品中毒素蛋白的檢測方法，目前主要采用針對單一毒素的抗體檢測技術，由于針對不同毒素需要制備相對應的抗體，且抗體制備過程冗長、成本高，不能滿足廣譜篩查檢測的要求。因此開發Bt Cry1類毒素廣譜篩查免疫檢測技術是一項很有應用價值的工作。

目前針對轉基因產品中毒素蛋白的檢測方法主要是集中在核酸和蛋白質分析?；贒NA-PCR的方法已被廣泛應用于Bt基因的檢測，它具有高度的敏感性。然而，PCR方法需要由經驗豐富的人員操作特定的儀器，不僅耗時且不適用于現場快速檢測。另一方面，基于蛋白質的檢測方法，酶聯免疫吸附測定試驗(ELISA)克服了前者的缺點，具有特異性強、靈敏度高、樣品前處理簡單、成本低、適用于現場批量檢測等優點，已應用于食品、醫療等多個領域。在ELISA過程中，抗體的特異性、靈敏度等將直接影響檢測結果，所以要建立針對Cry1類毒素的免疫學檢測技術，必須先制備出高質量的抗Cry1類毒素蛋白的廣譜型抗體。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是，克服現有技術的不足而提供Bt Cry1類毒素廣譜檢測用雙價抗體及其基因序列與應用。

本發明提供了Bt Cry1類毒素廣譜檢測用雙價抗體，該檢測用雙價抗體為V_L-V_L-2D3，所述雙價抗體V_L-V_L-2D3的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本發明還提供了雙價抗體V_L-V_L-2D3的基因序列。

編碼所述雙價抗體V_L-V_L-2D3的基因序列如SEQ ID NO.1所示。