[發(fā)明專利]一種高效抗腫瘤活性多肽Tubulysin M的制備方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 202010438990.2
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111690036A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳正治;龍伯華
• 申請（專利權(quán)）人: 深圳市老年醫(yī)學研究所;吳正治
• 主分類號: C07K5/078
• 分類號: C07K5/078;C07K1/02;C07K1/16
• 代理公司: 重慶宏知億知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 50260
• 代理人: 梁山丹

1.一種高效抗腫瘤活性多肽Tubulysin M的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括：

步驟S1，提供化合物2；

步驟S2，以化合物2作為關(guān)鍵原料制備活性多肽Tubulysin M；

其中，化合物2的化學式如下：

活性多肽TubulysinM的化學式如下：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的的制備方法，其特征在于，所述步驟S2采用如下合成路線：

其中，上述反應(yīng)式中使用的化合物3、化合物7和化合物9的化學式如下：

包括如下步驟：

(1)將化合物2于三氟乙酸中，加熱回流反應(yīng)至完畢，減壓濃縮，真空干燥后得到中間體；

將所述中間體溶于二氯甲烷，加入化合物3和HATU，攪拌均勻后加入二異丙乙基胺，于室溫下攪拌反應(yīng)，加水淬滅反應(yīng)，萃取，然后合并有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，分液，有機相加無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯的混合液為洗脫液進行柱層析分離，得到化合物4；

(2)將所述化合物4溶于二氯甲烷，在冰水浴冷卻下加入2,6-二甲基吡啶和叔丁基二甲硅基三氟甲磺酸酯，升到室溫攪拌反應(yīng)，加水淬滅反應(yīng)，萃取合并有機相，依次用稀鹽酸和飽和食鹽水洗滌，分液，有機相加無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯的混合液為洗脫液進行柱層析分離，得到化合物5；

(3)將所述化合物5溶于DMF，冰水浴冷卻下加入60％的氫化鈉固體，然后加入碘甲烷，緩慢升到室溫攪拌反應(yīng)，再用冰水浴冷卻，加飽和氯化銨水溶液淬滅反應(yīng)，萃取合并有機相，用水和飽和食鹽水洗滌，分液，有機相加無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯的混合液為洗脫液進行柱層析，分離得到化合物6；

(4)將所述化合物6溶于四氫呋喃/水混合溶劑，冰水浴冷卻下加入氫氧化鈉固體，然后升到室溫攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后冰水浴冷卻，酸化溶液至pH＝2，萃取合并有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，分液，有機相加無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到中間體酸；

將上述中間體酸溶于二氯甲烷，加入化合物7和HATU，攪拌均勻后加入二異丙乙基胺，于室溫下攪拌反應(yīng)，加水淬滅反應(yīng)，萃取合并有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，分液，有機相加無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯混合液為洗脫液進行柱層析，分離得到化合物8；

(5)將化合物8溶于四氫呋喃/水混合溶劑，加入三苯基膦，加熱回流反應(yīng)至完畢，減壓濃縮，再用甲苯除水，真空干燥得到中間體胺；

將所述中間體胺溶于二氯甲烷，加入化合物9和HATU，攪拌均勻后加入二異丙乙基胺，于室溫下攪拌反應(yīng)，加水淬滅反應(yīng)，萃取合并有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，分液，有機相加無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到粗品，用石油醚和乙酸乙酯混合液為洗脫液進行柱層析，分離得到化合物10；

(6)將所述化合物10溶于甲醇，加入氟化銨固體，加熱回流反應(yīng)，減壓濃縮，加水稀釋，萃取合并有機相，用飽和食鹽水洗滌，分液，有機相加無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到第一中間體；

將所述第一中間體溶于四氫呋喃/水混合溶劑，加入氫氧化鈉固體，然后加熱回流反應(yīng)，冰水浴冷卻，酸化至溶液pH＝2，萃取合并有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，分液，有機相加無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到第二中間體；

將所述第二中間體溶于吡啶，加入醋酸酐，于室溫下攪拌反應(yīng)，加水淬滅反應(yīng)，冰水浴冷卻，酸化至溶液pH＝2，萃取合并有機相，依次用水和飽和食鹽水洗滌，分液，有機相加無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，得到第三中間體；

將所述第三中間體溶于二氯甲烷，加入三氟乙酸，于室溫下攪拌反應(yīng)，減壓濃縮，干燥得到第四中間體；

將所述第四中間體溶于乙腈和甲醇的混合溶劑，加入甲醛水溶液，于室溫下攪拌反應(yīng)，加入氰基硼氫化鈉，攪拌反應(yīng)至完畢，滴加冰醋酸至溶液的pH＝5，然后于室溫下攪拌反應(yīng)至完畢，減壓濃縮，先用硅膠柱層析分離純化，再用異丙醚打漿純化，得到化合物1。