[發(fā)明專利]一種富集深海魚油中EPA和DHA的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010438979.6
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111647633B
• 公開（公告）日: 2022-02-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹茜;廖琳萌;包清彬;袁永俊;劉慶慶;潘亞瑜
• 申請（專利權(quán)）人: 西華大學(xué)
• 主分類號: C12P7/6432
• 分類號: C12P7/6432;C12P7/6434;C11B3/06
• 代理公司: 北京元本知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11308
• 代理人: 王紅霞

本發(fā)明提供了一種富集深海魚油中EPA和DHA的方法，包括如下步驟:(1)將sn?1,3位選擇性脂肪酶溶解在Tris?HCl緩沖液中，再加入酰基遷移促進(jìn)劑二氧化硅顆粒；(2)添加深海魚油，反應(yīng)過程中不斷磁力攪拌；(3)添加氫氧化鉀溶液和正己烷，充分震蕩后離心，轉(zhuǎn)移收集上層溶液并利用氮吹去除正己烷，除去正己烷后的余液即為富含EPA和DHA的脂質(zhì)。其優(yōu)點在于，在利用脂肪酶與酰基遷移促進(jìn)劑二氧化硅的協(xié)同催化后，魚油中EPA的富集得到顯著改善，甚至在達(dá)到最高含量后不再下降而進(jìn)入平臺期，由于DHA較難被脂肪酶水解，酶催化富集DHA一般存在平臺期，因此，當(dāng)EPA保持高含量的時間延長之后，就非常容易選擇到合適的反應(yīng)時間，使得EPA和DHA實現(xiàn)同步富集。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于油脂中特定脂肪酸的富集方法技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種富集深海魚油中EPA和DHA的方法。

背景技術(shù)

許多研究已證實，兩種ω-3長鏈多不飽和脂肪酸EPA和DHA對人體健康有諸多益處，隨著與其相關(guān)的功能性食品和保健品的市場不斷擴(kuò)大，對富含EPA和DHA的油脂的需求日益增加。然而，作為EPA和DHA主要來源的深海魚油的質(zhì)量和數(shù)量都急劇下降，因此深海魚油中EPA和DHA的富集受到關(guān)注。在富集的方法當(dāng)中，脂肪酶催化因為條件溫和以及對環(huán)境友好，成為最有前景的方法。脂肪酶通常具有脂肪酸選擇性，不易水解長鏈多不飽和脂肪酸EPA和DHA使其保留在甘油骨架上，而其他(鏈較短、不飽和鍵較少的)脂肪酸則被水解下去，從而實現(xiàn)甘油酯中EPA和DHA的富集。由于甘油酯sn-2位的空間位阻大于sn-1,3位，因此大部分的脂肪酶具有sn-1,3位選擇性，但魚油中EPA和DHA的位置分布顯著不同，EPA主要位于sn-1,3位而DHA主要位于sn-2位，這使得EPA被水解的風(fēng)險大于DHA；另一方面，由于EPA的碳鏈短于DHA且不飽和鍵數(shù)也少于DHA，使得EPA本身就比DHA更易被酶水解。以上兩個原因造成EPA的富集難度大于DHA，使得EPA和DHA的富集不同步，當(dāng)DHA富集到最大濃度時，EPA的含量已開始下降甚至低于富集前濃度，或者為了使EPA的含量較為可觀，只能提前終止反應(yīng)使得DHA未能達(dá)到最大濃度。因此，需要一種新的方法來改善現(xiàn)有酶催化富集EPA和DHA時存在的問題。

發(fā)明內(nèi)容

為解決現(xiàn)有技術(shù)中深海魚油中EPA和DHA難以同時高濃度富集的技術(shù)問題，本發(fā)明提供了一種富集深海魚油中EPA和DHA的方法，其實現(xiàn)的目的為，改善EPA的富集情況，使EPA和DHA的富集同步，從而能夠同時獲得高濃度的EPA和DHA。

為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明公開的技術(shù)方案為：本發(fā)明提供的一種富集深海魚油中EPA和DHA的方法，包括如下步驟：

(1)將sn-1,3位選擇性脂肪酶溶解在Tris-HCl緩沖液中，再加入酰基遷移促進(jìn)劑二氧化硅顆粒，磁力攪拌后得到含有脂肪酶和二氧化硅的分散體；

(2)向步驟(1)制備好的分散體中添加深海魚油，將所述催化劑和底物的混合物放入反應(yīng)容器中，反應(yīng)容器中充入氮氣后密封，反應(yīng)過程中不斷磁力攪拌；

(3)反應(yīng)結(jié)束后，向反應(yīng)溶液中添加氫氧化鉀溶液和正己烷，充分震蕩后離心，轉(zhuǎn)移收集上層溶液并利用氮吹去除正己烷，除去正己烷后的余液即為富含EPA和DHA的脂質(zhì)。

EPA在深海魚油的sn-2位含量相對較低，有較大的富集潛力。Sn-1,3位脂肪酶水解甘油三酯后會生成初級產(chǎn)物1,2-甘油二酯和次級產(chǎn)物2-甘油單酯，若體系中存在酰基遷移促進(jìn)劑，將兩種產(chǎn)物分別異構(gòu)化為1,3-甘油二酯和1-甘油單酯，則能繼續(xù)被sn-1,3位選擇性脂肪酶水解，使得原本位于sn-2位的其他(鏈較短、不飽和鍵較少的)脂肪酸也能被水解，這便有利于實現(xiàn)sn-2位EPA的富集潛力。本方法利用二氧化硅來達(dá)到促進(jìn)sn-2位酰基遷移的目的。

進(jìn)一步的，所述步驟(1)中sn-1,3位選擇性脂肪酶為米根霉脂肪酶。