[發明專利]具有抗皺修復功能的重組纖連蛋白及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 202010438531.4
• 申請日: 2020-05-22
• 公開（公告）號: CN111548410B
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發明（設計）人: 單玉飛;張開岳;左勝涵;吳雅勤;張貴鋒;孔英俊;陳江
• 申請（專利權）人: 江蘇邦特生物科技有限公司;中國科學院過程工程研究所;中科華啟（北京）生物技術研究院有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;C12N15/70;A61K8/64;A61Q19/00;A61Q19/02;A61Q19/08
• 代理公司: 鄭州豫乾知識產權代理事務所(普通合伙) 41161
• 代理人: 李保平

1.一種具有抗皺修復功能的重組纖連蛋白在制備修復皮膚損傷、抗皺以及淡斑的產品中的應用，其特征在于，所述重組纖連蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，編碼核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。

2.如權利要求1所述的具有抗皺修復功能的重組纖連蛋白的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：

(1)載體構建：截取天然纖連蛋白的RGD結構域與多肽連接片段，以所述多肽連接片段連接所述RGD結構域與鈉離子通道結合肽段，獲得重組纖連蛋白rFN的編碼DNA如SEQ IDNO.10所示，將所述重組纖連蛋白rFN的編碼DNA接入pSmart-I載體中，獲得融合蛋白His-SUMO-rFN的重組表達載體pSmart-I-rFN質粒;

(2)搖瓶表達：將所述重組表達載體pSmart-I-rFN質粒轉入大腸桿菌表達菌株，搖瓶鑒定，獲得陽性工程菌;

(3)規模發酵：將所述陽性工程菌接種至培養基中培養，得到種子液，將所述種子液接種到發酵培養基中發酵、加入誘導劑誘導表達，離心得到發酵菌泥;

(4)超耐鎳親和純化：將步驟(3)中得到的發酵菌泥均質破碎，離心過濾處理，上柱進行第三代超耐鎳親和純化，得到洗脫后的融合蛋白His-SUMO-rFN;

(5)酶切回掛除去標簽、離子柱精制純化：取步驟(4)獲得的洗脫后的融合蛋白His-SUMO-rFN，加入ULP1蛋白酶用于切除純化標簽His-SUMO，得到酶切后的重組纖連蛋白rFN緩沖液，稀釋緩沖液后回掛超耐受鎳柱，合并穿出液與沖洗液，采用低鹽PB緩沖液進行離子交換填料精純、洗脫。

3.如權利要求2所述的具有抗皺修復功能的重組纖連蛋白的制備方法，其特征在于：所述純化標簽His-SUMO的SUMO部分的N端包含一段用于純化的組氨酸標簽，所述純化標簽His-SUMO的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，編碼核酸序列如SEQ ID NO.6所示。

4.如權利要求2所述的具有抗皺修復功能的重組纖連蛋白的制備方法，其特征在于：所述ULP1蛋白酶氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，編碼核酸序列如SEQ ID NO.8所示，選自釀酒酵母。