[發明專利]一種提高經濟作物對黃瓜花葉病毒抗性的方法

有效

• 申請號: 202010434937.5
• 申請日: 2020-05-21
• 公開（公告）號: CN111763688B
• 公開（公告）日: 2022-06-24
• 發明（設計）人: 張大偉;林宏輝;易克賢;楊峰
• 申請（專利權）人: 四川大學;中國熱帶農業科學院環境與植物保護研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00;A01H6/20;A01H6/82
• 代理公司: 成都魚爪智云知識產權代理有限公司 51308
• 代理人: 代述波

1.一種提高經濟作物對黃瓜花葉病毒抗性的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)于1/2MS平板或土壤中，光照培養作物16h后，再暗培養作物8h；

(2)將構建得到的過表達載體Flag-HA-WRKY30OX轉入步驟(1)培育得到的植物材料的愈傷組織中；所述過表達載體Flag-HA-WRKY30OX為含有35S啟動子驅動的過表達載體Flag-HA-WRKY30OX；

(3)繼代2～3次后，提取總RNA，并篩選出成功轉入WRKY30OX的植株進行培養即可；

所述作物為煙草、油菜或西藍花。

2.根據權利要求1所述的提高經濟作物對黃瓜花葉病毒抗性的方法，其特征在于，所述WRKY30基因的核苷酸序列在Genbank中的編號位置為AT5G24110。

3.根據權利要求1所述的提高經濟作物對黃瓜花葉病毒抗性的方法，其特征在于，步驟(3)通過RT-PCR鑒定作物中WRKY30基因的表達情況，并篩選出成功轉入WRKY30OX的植株。

4.根據權利要求3所述的提高經濟作物對黃瓜花葉病毒抗性的方法，其特征在于，所述RT-PCR的反應體系包括：2μL 10×PCR Buffer、1.6μL DNTPs(2.5mM)、1.2μL L-primer(100pmol/μL)、1.2μL R-primer(100pmol/μL)、0.2μL TaqDNA Polymerase(3U/μL)、1μLcDNA，最后用ddH₂O補足至20μL。

5.根據權利要求3所述的提高經濟作物對黃瓜花葉病毒抗性的方法，其特征在于，所述RT-PCR的反應程序為：94℃預變性5min；94℃變性1min；51℃退火30s；72℃延伸30s；共30個循環，最后72℃延伸10min。