[發明專利]作物膠孢炭疽病菌特異性SSR標記及其檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202010434257.3
• 申請日: 2020-05-21
• 公開（公告）號: CN111676306A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 譚新球;張卓;陳岳;鄭立敏;劉勇;張德詠;歐陽超;劉思珍;李成剛;史曉斌;朱春暉;曾泉
• 申請（專利權）人: 湖南省植物保護研究所
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400
• 代理人: 歐陽石文

1.一種用于作物膠孢炭疽病菌特異性的SSR標記，所述SSR標記的引物選自S1、S3、S4、S6、S7、S8、S127引物對之一，擴增獲得的片段即為SSR標記；

其各引物的序列如下：

2.一種用于檢測作物膠孢炭疽病菌特異性的引物對，其選自S1、S3、S4、S6、S7、S8、S127對引物之一；其各引物的序列如下：

3.一種用于檢測作物膠孢炭疽病菌的試劑盒，其包括S1、S3、S4、S6、S7、S8、S127對引物之一或更多對；其各引物的序列如下：

4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還包括用于PCR擴增所需的成分，例如PCR擴增酶、緩沖液，基因組提取試劑；還包括用于檢測的試劑例如凝膠電泳中的試劑，更具體采用如TBE-PAGE電泳的試劑。

5.一種檢測作物膠孢炭疽病菌的方法，其采用選自S1、S3、S4、S6、S7、S8、S127引物對之一或其組合，對待檢測樣品的基因組DNA模板進行擴增，對擴增產物進行檢測；

其各引物對的序列如下：

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，采用S3、S4、S7、S8、S12引物對之一或多對引物分別對待測樣品進行檢測，以確定膠孢炭疽病菌種群內的遺傳多樣性，更進一步地，再采用S6或S1的引物對待樣品進行檢測，以區分是膠孢炭疽病菌的寄主來源。

7.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于，對擴增產物進行檢測采用凝膠電泳進行，更具體的可以采用TBE-PAGE電泳檢測。

8.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述檢測方法的擴增退火溫度為57℃。

9.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于，擴增的反應條件是：PCR反應體系按25μL計：10×含Mg2⁺Taq Buffer 2.50μL，2.5mmol/L dNTP混合物2.0μL，20μmol/L的上下游引物各1.0μL，Taq DNA聚合酶0.5μL，模板DNA 0.8μL，加ddH₂O充至25μL；PCR反應條件：94℃3min，94℃30s，57℃45s，72℃30s，32個循環，72℃10min，擴增后產物在4℃保存。

10.如權利要求5或6所述的方法，其特征在于，所述作物選自辣椒、大豆、茶樹草莓、蘋果、香蕉、芒果。