[發明專利]一種人類精子冷凍保存方法

在審

• 申請號: 202010434098.7
• 申請日: 2020-05-21
• 公開（公告）號: CN111436421A
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 胡煥煥;姬國杰;石曉衛;劉瑞;李明文;張靖;張晗;王朋博;秦冰鑫;蘭慶凱;沈宇杰
• 申請（專利權）人: 新鄉醫學院三全學院
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223
• 代理人: 俞曉明

1.一種人類精子冷凍保存方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1、將精液液化，得到液化精液；

S2、將S1得到的液化精液洗滌，離心，重復上述操作2～4次，然后在培養箱中培養，得到精子樣品；

S3、將S2得到的精子樣品與海藻糖溶液混勻，得到混合液；

所述S2得到的精子樣品與海藻糖溶液的體積比為1:1，且所述海藻糖溶液的濃度為0.25～1.0mol/L；

S4、將S3得到的混合液與添加劑混合均勻，接著在培養箱中平衡，然后裝入保存容器中，浸入液氮中進行玻璃化冷凍保存；所述S3得到的混合液與冷凍液的體積比為200:1；

所述添加劑由以下濃度的組分組成：

L-還原型谷胱甘肽15.365～122.92g/L、氯化鈉5.7154g/L、氯化鉀0.3496g/L、硫酸鎂0.0241g/L、磷酸二氫鉀0.0504g/L、二水合氯化鈣0.3000g/L、碳酸氫鈉2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸鈉0.0363g/L、乳酸鈉3.9968g/L、硫酸慶大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量為超純水。

2.根據權利要求1所述的人類精子冷凍保存方法，其特征在于，步驟S2中，所述S1得到的液化精液通過人輸卵管液進行洗滌，且所述人輸卵管液由以下濃度的組分組成：

氯化鈉5.7154g/L、氯化鉀0.3496g/L、硫酸鎂0.0241g/L、磷酸二氫鉀0.0504g/L、二水合氯化鈣0.3000g/L、碳酸氫鈉2.1003g/L、葡萄糖0.5008g/L、丙酮酸鈉0.0363g/L、乳酸鈉3.9968g/L、硫酸慶大霉素0.0100g/L、人血清白蛋白5g/L，余量為超純水。

3.根據權利要求2所述的人類精子冷凍保存方法，其特征在于，所述S1得到的液化精液與人輸卵管液的體積比為1:2。

4.根據權利要求1所述的人類精子冷凍保存方法，其特征在于，步驟S2和S4中，所述培養箱為CO₂培養箱。

5.根據權利要求1所述的人類精子冷凍保存方法，其特征在于，步驟S4中，所述保存容器為冷凍麥管。