[發明專利]一種兩性離子修飾樹狀大分子包裹金納米顆粒/HIF-1α siRNA復合物的制備

在審

• 申請號: 202010430439.3
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN111671897A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 史向陽;楊超;高悅;曹雪雁;肖云超;曹流;宋聰;李錦;劉勇
• 申請（專利權）人: 東華大學;上海市第一人民醫院
• 主分類號: A61K41/00
• 分類號: A61K41/00;A61K31/7088;A61K47/34;A61P35/00;C12N15/87;C08G73/02
• 代理公司: 上海泰能知識產權代理事務所 31233
• 代理人: 魏峯;黃志達

本發明涉及一種兩性離子修飾樹狀大分子包裹金納米顆粒/HIF?1αsiRNA復合物的制備方法。該制備方法包括：G5.NH₂?PS₂₀溶液制備；{(Au⁰)₂₅?G5.NH₂?PS₂₀}制備；{(Au⁰)₂₅?G5.NH₂?PS₂₀}/si?HIF?1α制備。該方法制備的基因載體不僅安全性高、易合成、產率高，而且還具有良好的基因轉染效率，并且可用于含血清環境的siRNA轉染。

技術領域

本發明屬于納米材料基因載體制備領域，特別涉及一種兩性離子修飾樹狀大分子包裹金納米顆粒/HIF-1α siRNA復合物的制備方法。

背景技術

目前，癌癥的常規治療主要包括手術、化療、放療等，但這些治療手段都存在其各自的局限性。例如，手術治療存在切除殘留、易復發等問題，且只能用于局部腫瘤治療，不適用于癌癥晚期患者；而化療通常存在藥物副作用大、腫瘤耐藥性等問題；放射治療在腫瘤治療中的作用和地位日益突出，已成為治療惡性腫瘤的主要手段之一，但是由于腫瘤的乏氧環境導致其對實體瘤的放療敏感性較低，削減了放療的治療效果。因此，針對腫瘤放療中存在的關鍵問題，改善腫瘤的乏氧環境提高放射敏感性成為腫瘤放射治療的研究重點。

研究表明，90％的實體瘤都存在乏氧區，而支持腫瘤在乏氧條件下繼續生長的關鍵因子就是乏氧誘導因子(HIFs)。一方面，HIFs的存在使得腫瘤細胞能夠適應乏氧微環境，從而能在缺氧條件下繼續增殖；另一方面，HIFs的表達(主要是HIF-1α)抑制活性氧(ROS)生成，從而使得腫瘤表現出放療抗拒。于去年獲得諾貝爾生理學或醫學獎的三位科學家威廉·凱林(William G.Kaelin,Jr.)、彼得·拉特克利夫(Peter J.Ratcliffe)以及格雷格·塞門扎(Gregg L.Semenza)所提出的氧感知通路指出，通過下調HIF-1α的表達有望對抗惡性腫瘤。具體而言，就是用HIF-1α siRNA去沉默HIF-1α的表達，破壞腫瘤適應乏氧環境的關鍵樞紐，從而抑制腫瘤生長，增強放療敏感性。而目前常見的基因轉染載體普遍存在生物安全性、免疫原性或者轉染效率等方面的問題。因此，尋找安全、高效的轉染載體，保證HIF-1α siRNA的成功轉染和表達是實現乏氧抑制和放療增敏的關鍵。

聚酰胺-胺(PAMAM)樹狀大分子是一種高度支化、結構明確的新型超支化聚合物，具有獨特的單分散性和豐富的表面氨基官能團，其作為基因載體具有基因壓縮包覆能力強、免疫原性低、轉染效率高等突出優勢，有一種優良的基因傳遞載體。研究表明，利用樹狀大分子的內部空腔負載納米金顆粒，可進一步提高基因負載能力，并顯著提高其轉染效率。

丙烷磺內酯(1,3-PS)是一種同時含有陰、陽離子基團的兩性離子。作為一種新型的抗污修飾材料，1,3-PS表現出比傳統抗污材料聚乙二醇更好的生物相容性和穩定性。此外，本課題組研究發現，修飾了兩性離子的樹狀大分子因其較好的抗污性能，而具有更長的血液循環時間和更好的基因傳遞效率，可用于血清增強的基因傳遞載體(ActaBiomater.2019,99,320-329)，大大優于傳統的非病毒載體。

檢索國內外相關文獻和專利結果表明，用包裹納米金顆粒的樹狀大分子作為納米平臺，在其表面修飾兩性離子丙烷磺內酯并負載HIF-1α siRNA，用于腫瘤增強放療的研究，目前尚未有報道。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種兩性離子修飾樹狀大分子包裹金納米顆粒/HIF-1α siRNA復合物的制備方法，以克服現有技術中基因轉染載體轉染效率不好等缺陷。

本發明提供一種聚酰胺-胺樹狀大分子復合物，所述復合物為1,3-PS修飾的聚酰胺-胺樹狀大分子包裹金納米顆粒負載HIF-1α siRNA。

本發明還提供一種聚酰胺-胺樹狀大分子復合物的制備方法，包括：