[發(fā)明專利]一種基于UPLC/HRMS的代謝組學(xué)相對定量分析方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010429597.7
• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN111579665B
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐英;任建洪;謝桂綱;戴貞麗;顧夢南;谷從順
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州帕諾米克生物醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/86
• 代理公司: 北京林達(dá)劉知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11277
• 代理人: 劉新宇;李茂家

1.一種基于UPLC/HRMS的代謝組學(xué)相對定量分析方法，其包括下列步驟：

1)基于多種同位素內(nèi)標(biāo)，配制同位素內(nèi)標(biāo)混合溶液；

2)基于代謝組學(xué)樣本，確定與之匹配的相對定量校正樣本，并利用所述相對定量校正樣本和步驟1)中所述同位素內(nèi)標(biāo)混合溶液，配制一系列濃度梯度的相對定量標(biāo)準(zhǔn)曲線校正溶液；

3)利用步驟2)中所述代謝組學(xué)樣本和步驟1)中所述同位素內(nèi)標(biāo)混合溶液，配制代謝組學(xué)樣本溶液；

4)利用UPLC/HRMS平臺，采集步驟3)中所述代謝組學(xué)樣本溶液和步驟2)中所述一系列濃度梯度的相對定量標(biāo)準(zhǔn)曲線校正溶液的原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)；

5)基于步驟4)中所述原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)，獲得一級質(zhì)譜轉(zhuǎn)置數(shù)據(jù)和二級質(zhì)譜轉(zhuǎn)置數(shù)據(jù)，并基于所述一級質(zhì)譜轉(zhuǎn)置數(shù)據(jù)，獲得包括多種一級變量信息的解卷積結(jié)果；

6)結(jié)合步驟5)中所述一級質(zhì)譜轉(zhuǎn)置數(shù)據(jù)的解卷積結(jié)果與所述二級質(zhì)譜轉(zhuǎn)置數(shù)據(jù)，并參比單個同位素內(nèi)標(biāo)的一級變量信息和二級變量信息，鑒定同位素內(nèi)標(biāo)，并選擇用于線性擬合的最優(yōu)同位素內(nèi)標(biāo)；

7)利用步驟2)中所述一系列濃度梯度的相對定量標(biāo)準(zhǔn)曲線校正溶液的濃度及其在步驟5)中獲得的一級變量信息進(jìn)行線性擬合，獲得線性方程；

8)基于步驟7)中所述線性方程，得到步驟3)中所述代謝組學(xué)樣本溶液的相對定量結(jié)果，并完成主成分分析和一級變量信息的差異代謝物分析；和

9)結(jié)合步驟5)中所述一級質(zhì)譜轉(zhuǎn)置數(shù)據(jù)的解卷積結(jié)果與所述二級質(zhì)譜轉(zhuǎn)置數(shù)據(jù)，完成代謝物鑒定和差異代謝物鑒定；

其中，步驟6)中所述最優(yōu)同位素內(nèi)標(biāo)的選擇步驟為：將相對定量校正樣本中一級變量峰面積與同位素內(nèi)標(biāo)混合溶液中每種內(nèi)標(biāo)的一級變量峰面積進(jìn)行比值，再與相對定量校正樣本濃度線性擬合后獲得相關(guān)系數(shù)r，選擇r值最大以及相對定量校正樣本中一級變量的濃度范圍介于0.05P～5P的同位素內(nèi)標(biāo)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的代謝組學(xué)相對定量分析方法，其特征在于：

步驟1)中所述同位素內(nèi)標(biāo)混合溶液通過下列方法制得：先取適量的多種同位素內(nèi)標(biāo)，分別加入溶劑，配制成一定濃度的單一同位素內(nèi)標(biāo)母液，再分別取適量的各種單一同位素內(nèi)標(biāo)母液，混合并加入溶劑，得到同位素內(nèi)標(biāo)混合溶液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的代謝組學(xué)相對定量分析方法，其特征在于：

步驟2)中所述代謝組學(xué)樣本為血清或血漿樣本，所述相對定量校正樣本為NIST血清。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的代謝組學(xué)相對定量分析方法，其特征在于：

步驟2)中所述一系列濃度梯度的相對定量標(biāo)準(zhǔn)曲線校正溶液通過下列方法制得：取一系列體積的相對定量校正樣本，分別加入同位素內(nèi)標(biāo)和蛋白沉淀試劑，混合，離心，取上清液，濃縮，向殘渣中加入復(fù)溶溶劑，混合，取上清液，得到一系列濃度梯度的相對定量標(biāo)準(zhǔn)曲線校正溶液。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的代謝組學(xué)相對定量分析方法，其特征在于：

步驟3)中所述代謝組學(xué)樣本溶液通過下列方法制得：取代謝組學(xué)樣本，分別加入同位素內(nèi)標(biāo)和蛋白沉淀試劑，混合，離心，取上清液，濃縮，向殘渣中加入復(fù)溶溶劑，混合，取上清液，得到代謝組學(xué)樣本溶液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的代謝組學(xué)相對定量分析方法，其特征在于：

步驟5)中所述一級質(zhì)譜轉(zhuǎn)置數(shù)據(jù)和二級質(zhì)譜轉(zhuǎn)置數(shù)據(jù)通過數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)置的方式獲得，所述數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)置通過開源的ProteoWizard軟件來完成。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的代謝組學(xué)相對定量分析方法，其特征在于：

步驟5)中所述解卷積結(jié)果通過解卷積的方式獲得，所述解卷積通過BioDeep代謝組學(xué)云分析平臺或開源R軟件來完成。