[發(fā)明專利]一種早期快速診斷雞白痢沙門氏菌的試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010429519.7
• 申請(qǐng)日: 2020-05-20
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111560449A
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊曙明;劉瑞;陳愛(ài)亮
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/689
• 分類號(hào): C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/42
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 秦夢(mèng)楠

1.試劑盒；包括試紙條、特異引物對(duì)和金標(biāo)探針；

所述試紙條包括樣品吸收墊、反應(yīng)膜、吸水墊和底板；沿樣品流動(dòng)方向，所述樣品吸收墊、所述反應(yīng)膜、所述吸水墊依次固定于所述底板上；所述試紙條的反應(yīng)膜上包括檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)；所述檢測(cè)區(qū)包被有鏈霉親和素；所述質(zhì)控區(qū)包被有質(zhì)控探針；

所述特異引物對(duì)由引物F和引物R組成；

所述引物F如SEQ ID No.1所示；所述引物R如SEQ ID No.2所示；

所述引物F采用生物素修飾；所述引物R由區(qū)段A和區(qū)段B組成；所述區(qū)段A和區(qū)段B中間采用3個(gè)亞甲基修飾；

所述金標(biāo)探針部分區(qū)段可與所述引物R的區(qū)段A互補(bǔ)配對(duì)，且該區(qū)段也可與質(zhì)控探針互補(bǔ)配對(duì)；所述金標(biāo)探針連接有納米金；

所述質(zhì)控探針采用生物素修飾；

所述試劑盒的用途為如下(1)或(2)或(3)：

(1)鑒定待測(cè)病原菌是否為雞白痢沙門氏菌；

(2)檢測(cè)待測(cè)樣本中是否含有雞白痢沙門氏菌；

(3)診斷或輔助診斷雞白痢沙門氏菌病。

2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于：

所述引物F的5’端采用生物素修飾；

所述質(zhì)控探針的5’端采用生物素修飾。

3.如權(quán)利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于：

所述區(qū)段A如SEQ ID No.2自5’端第1-19位所示；

所述區(qū)段B如SEQ ID No.2自5’端第20-49位所示。

4.如權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于：

所述金標(biāo)探針如SEQ ID No.3所示；所述質(zhì)控探針如SEQ ID No.4所示。

5.如權(quán)利要求1至4任一所述的試劑盒，其特征在于：

所述檢測(cè)區(qū)是將為4mg/mL～10mg/mL的鏈霉親和素包被于反應(yīng)膜上形成的；

所述質(zhì)控區(qū)是將1mg/mL的鏈霉親和素與100μM的質(zhì)控探針室溫下反應(yīng)1～3小時(shí)然后包被于反應(yīng)膜上形成的。

6.鑒定待測(cè)病原菌是否為雞白痢沙門氏菌的方法，包括如下步驟：(1)提取待測(cè)病原菌的基因組DNA；以所述基因組DNA為模板，采用權(quán)利要求1中所述的特異引物對(duì)進(jìn)行RAA反應(yīng)；(2)將步驟(1)得到的反應(yīng)產(chǎn)物、權(quán)利要求1至4中任一所述的金標(biāo)探針和展開(kāi)液混勻后加至權(quán)利要求1至5中任一所述的試紙條的樣品吸收墊中；根據(jù)試紙條顯色結(jié)果進(jìn)行判斷，如果質(zhì)控區(qū)顯色且檢測(cè)區(qū)顯色，則待測(cè)病原菌為雞白痢沙門氏菌；如果質(zhì)控區(qū)顯色且檢測(cè)區(qū)不顯色，則待測(cè)病原菌不為雞白痢沙門氏菌；若質(zhì)控區(qū)不顯色，則檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。

7.檢測(cè)待測(cè)樣本中是否含有雞白痢沙門氏菌的方法，包括如下步驟：(1)提取待測(cè)樣本的基因組DNA；以所述基因組DNA為模板，采用權(quán)利要求1中所述的特異引物對(duì)進(jìn)行RAA反應(yīng)；(2)將步驟(1)得到的反應(yīng)產(chǎn)物、權(quán)利要求1至4中任一所述的金標(biāo)探針和展開(kāi)液混勻后加至權(quán)利要求1至5中任一所述的試紙條的樣品吸收墊中；根據(jù)試紙條顯色結(jié)果進(jìn)行判斷，如果質(zhì)控區(qū)顯色且檢測(cè)區(qū)顯色，則待測(cè)樣本中含有雞白痢沙門氏菌；如果質(zhì)控區(qū)顯色且檢測(cè)區(qū)不顯色，則待測(cè)樣本中不含有雞白痢沙門氏菌；若質(zhì)控區(qū)不顯色，則檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。

8.權(quán)利要求1中所述的特異引物對(duì)。

9.引物探針組合，包括權(quán)利要求1至3中任一所述的特異引物對(duì)、金標(biāo)探針和質(zhì)控探針。

10.權(quán)利要求8所述的特異引物對(duì)或權(quán)利要求9所述的引物探針組合在制備產(chǎn)品中的應(yīng)用；所述產(chǎn)品的用途為如下(1)或(2)或(3)：

(1)鑒定待測(cè)病原菌是否為雞白痢沙門氏菌；

(2)檢測(cè)待測(cè)樣本中是否含有雞白痢沙門氏菌；

(3)診斷或輔助診斷雞白痢沙門氏菌病。