[發(fā)明專利]一種用于結直腸癌檢測的DNA甲基化試劑盒及使用方法、應用

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• 申請日: 2020-05-20
• 公開（公告）號: CN111560435A
• 公開（公告）日: 2020-08-21
• 發(fā)明（設計）人: 王志強;萬季;蔡雪兒;羅海燕;王一杏;夏迪;汪健;金泰慶;余濤;關建洪;王奕;宋麒
• 申請（專利權）人: 深圳市新合生物醫(yī)療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6827;C12N15/11
• 代理公司: 北京冠和權律師事務所 11399
• 代理人: 朱健

1.一種用于結直腸癌檢測的DNA甲基化試劑盒，其特征在于，包括檢測或測量受試樣品DNA中一種或多種特定基因的甲基化狀態(tài)或水平的特異性引物和探針，所述特定基因為SEPT9、NDRG4和ACTB。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，用于檢測SEPT9基因甲基化狀態(tài)的特異性引物和探針選自下述三種特異性引物和探針組合中的任一種：特異性引物SEQ ID NO:1-2和探針SEQ ID NO:3、特異性引物SEQ ID NO:4-5和探針SEQ ID NO:6、特異性引物SEQ IDNO:7-8和探針SEQ ID NO:9。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，用于檢測NDRG4基因甲基化狀態(tài)的特異性引物和探針選自下述三種特異性引物和探針組合中的任一種：特異性引物SEQ ID NO:10-11和探針SEQ ID NO:12、特異性引物SEQ ID NO:13-14和探針SEQ ID NO:15、特異性引物SEQ ID NO:16-17和探針SEQ ID NO:18。

4.根據權利要求1-3任一所述的試劑盒，其特征在于，用于檢測ACTB基因甲基化狀態(tài)的特異性引物SEQ ID NO:19-20和探針SEQ ID NO:21。

5.根據權利要求1-4任一所述的試劑盒，其特征在于，所述特異性引物SEQ ID NO:1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20均經過硫代磷酸酯修飾，且在嚴格條件下與甲基化或非甲基化的目標基因區(qū)域雜交；

和/或，所述探針SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21是基于TaqManTM設計的，且在嚴格條件下與甲基化或非甲基化的目標基因區(qū)域雜交。

6.根據權利要求1-5任一所述的試劑盒，其特征在于，所述SEPT9基因探針SEQ ID NO:3、6、9核苷酸序列5’端標記ABY，3’端標記QSY；

和/或，所述NDRG4基因探針SEQ ID NO:12、15、18核苷酸序列5’端標記JUN，3’端標記QSY；

和/或，所述ACTB基因探針SEQ ID NO:21核苷酸序列5’端標記VIC，3’端標記MGBNFQ。

7.根據權利要求1-6任一所述的試劑盒，其特征在于，所述特異性引物SEQ ID NO:1、2、4、5、7、8、10、11、13、14、16、17、19、20和所述探針SEQ ID NO:3、6、9、12、15、18、21的長度為10-50nt。

8.根據權利要求1-7任一所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包含下述組成部分：dNTP混合溶液、MgCl₂溶液、DNA聚合酶、PCR反應緩沖液、PCR去離子水；

和/或，所述試劑盒中還包含下述組成部分：血漿游離DNA提取試劑和血漿游離DNA甲基化轉化試劑；

和/或，所述血漿游離DNA甲基化轉化試劑為亞硫酸氫鹽；

和/或，所述受試樣品DNA為完整基因組、無細胞DNA或循環(huán)腫瘤DNA。