[發(fā)明專利]一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010426398.0 | 申請日： | 2020-05-19 |
| 公開（公告）號： | CN111440841A | 公開（公告）日： | 2020-07-24 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 丁侃;陳霞;孫成新;姚曉東;王秋雨;張艷麗 | 申請（專利權(quán)）人： | 愛禮康生物醫(yī)藥（蘇州）有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/04 | 分類號： | C12Q1/04 |
| 代理公司： | 重慶強(qiáng)大凱創(chuàng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 50217 | 代理人： | 萬國松 |
| 地址： | 215100 江蘇省蘇州市*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 檢測 膳食 纖維 腸道 活性 影響 方法 | ||
本方案公開了細(xì)菌活性檢測領(lǐng)域的檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法，包括對擬桿菌的檢測，具體步驟如下：一、擬桿菌培養(yǎng)基的配制；二、培養(yǎng)擬桿菌至其達(dá)到對數(shù)生長期并收集，使用擬桿菌培養(yǎng)基洗滌擬桿菌，再用擬桿菌培養(yǎng)基將擬桿菌菌液濃度稀釋至OD600值為0.2～0.23；三、在96孔板中，每孔分別加入100μL稀釋后的擬桿菌菌液和100μL膳食纖維溶液，使最終每孔中菌體濃度為OD600為0.09～0.11；然后在37℃恒溫厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，并記錄每12h的OD600值；四、根據(jù)每個時間點(diǎn)記錄的擬桿菌的OD600值，繪制擬桿菌在膳食纖維作用下的生長曲線。本方案通過優(yōu)化擬桿菌培養(yǎng)基，使得擬桿菌在培養(yǎng)基中的生長狀態(tài)與在人腸道內(nèi)的生長狀態(tài)更加貼合，從而提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于細(xì)菌活性檢測領(lǐng)域，特別涉及一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法。
背景技術(shù)
腸道菌群是指腸道內(nèi)的微生物，在人的腸道內(nèi)大約有10萬億個微生物，這些微生物在調(diào)控營養(yǎng)吸收、維持上皮細(xì)胞發(fā)育、調(diào)節(jié)先天性免疫等方面具有非常重要的作用。厚壁菌門和擬桿菌門占據(jù)的數(shù)量最多。
膳食纖維是一種可食用的碳水化合物的聚合物，含有三個或三個以上的單體單元，對內(nèi)源性消化酶有抗性，因此在小腸內(nèi)既不被水解也不被吸收。由于膳食纖維無法被人體自身消化降解，而定植在人體腸道內(nèi)腔中的腸道菌群含有豐富的多糖水解酶，因此膳食纖維多為腸道菌群代謝降解，并對腸道菌群產(chǎn)生一定的影響，進(jìn)而影響宿主健康?，F(xiàn)今多數(shù)有益健康的膳食纖維被稱為益生元，與之相對應(yīng)的有益生菌，即服用一定數(shù)量后有益于宿主健康的獲得性微生物，最常見的益生菌主要是乳酸菌屬和雙歧桿菌屬，它們可選擇性分解利用的常見益生元是低聚果糖(FOS)、低聚半乳糖(GOS)和菊粉等。
在食品、飲料等制作過程中，往往需要加入膳食纖維，通過膳食纖維改善人體腸道，進(jìn)而提高食品或飲料的品質(zhì)。當(dāng)前對人體腸道菌活性的檢測主要是通過使用培養(yǎng)基培養(yǎng)腸道菌，然后向培養(yǎng)基中添加膳食纖維以檢測膳食纖維對人體腸道菌的活性影響。現(xiàn)有技術(shù)中的培養(yǎng)基由于組分不合理，導(dǎo)致培養(yǎng)的微生物生長狀態(tài)與在腸道中差異較大，使得膳食纖維對人腸道菌活性檢測結(jié)果誤差較大。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明意在提供一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法，以解決現(xiàn)有技術(shù)采用組分不合理的培養(yǎng)基對待檢測微生物進(jìn)行培養(yǎng)，進(jìn)而影響檢測結(jié)果的問題。
本方案中的一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法，包括對擬桿菌的檢測，具體步驟如下：
步驟一、擬桿菌培養(yǎng)基的配制：100mM KH2PO4(pH 7.2)，15mM NaCl，8.5mM(NH4)2SO4，4mM L-半胱氨酸，1.9μM氯化血紅素，200μM L-組氨酸，100nM MgCl2，1.4nM FeSO4·7H2O，50μM CaCl2，1μg/mL維生素K3，5ng/mL維生素B12；
步驟二、培養(yǎng)擬桿菌至其達(dá)到對數(shù)生長期并收集，使用擬桿菌培養(yǎng)基洗滌收集的擬桿菌，再用擬桿菌培養(yǎng)基將擬桿菌菌液濃度稀釋至OD600值為0.2～0.23；
步驟三、在96孔板中，每孔分別加入100μL稀釋后的擬桿菌菌液和100μL膳食纖維溶液，使最終每孔中菌體濃度為OD600為0.09～0.11；然后在37℃恒溫厭氧培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，并記錄每12h的OD600值；
步驟四、根據(jù)每個時間點(diǎn)記錄的擬桿菌的OD600值，繪制擬桿菌在膳食纖維作用下的生長曲線。
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