[發明專利]一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法

在審

• 申請號: 202010426398.0
• 申請日: 2020-05-19
• 公開（公告）號: CN111440841A
• 公開（公告）日: 2020-07-24
• 發明（設計）人: 丁侃;陳霞;孫成新;姚曉東;王秋雨;張艷麗
• 申請（專利權）人: 愛禮康生物醫藥（蘇州）有限公司
• 主分類號: C12Q1/04
• 分類號: C12Q1/04
• 代理公司: 重慶強大凱創專利代理事務所(普通合伙) 50217
• 代理人: 萬國松

1.一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法，其特征在于：包括對擬桿菌的檢測，具體步驟如下：

步驟一、擬桿菌培養基的配制：100mM KH₂PO₄(pH 7.2)，15mM NaCl，8.5mM (NH₄)₂SO₄，4mM L-半胱氨酸，1.9μM氯化血紅素，200μM L-組氨酸，100nM MgCl₂，1.4nM FeSO₄·7H₂O，50μM CaCl₂，1μg/mL維生素K₃，5ng/mL維生素B₁₂；

步驟二、培養擬桿菌至其達到對數生長期并收集，使用擬桿菌培養基洗滌收集的擬桿菌，再用擬桿菌培養基將擬桿菌菌液濃度稀釋至OD₆₀₀值為0.2～0.23；

步驟三、在96孔板中，每孔分別加入100μL稀釋后的擬桿菌菌液和100μL膳食纖維溶液，使最終每孔中菌體濃度為OD600為0.09～0.11；然后在37℃恒溫厭氧培養箱中培養72h，并記錄每12h的OD₆₀₀值；

步驟四、根據每個時間點記錄的擬桿菌的OD₆₀₀值，繪制擬桿菌在膳食纖維作用下的生長曲線。

2.根據權利要求1所述的一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法，其特征在于：步驟二中培養擬桿菌的具體步驟是：使用含有5％胎牛血清的TSB培養基復蘇凍存于-80℃的擬桿菌，在厭氧培養箱中培養24h，厭氧箱條件為：10％CO₂，10％H₂，80％N₂。

3.根據權利要求2所述的一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法，其特征在于：所述擬桿菌包括多形擬桿菌、卵形擬桿菌、脆弱擬桿菌和解纖維素擬桿菌中的至少一種。

4.根據權利要求1～3任一項所述的一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法，其特征在于：還包括對益生菌的檢測，具體步驟如下：

步驟一、益生菌培養基的配制：細菌蛋白胨6.5g/L，大豆蛋白胨5.0g/L，胰蛋白胨2.5g/L，酵母提取物3.0g/L，KCl 2.0g/L，NaHCO₃ 0.2g/L，NaCl 4.5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，CaCl₂·2H₂O 0.45g/L，MnSO₄·H₂O 0.2g/L，FeSO₄·7H₂O 0.005g/L，ZnSO₄·7H₂O 0.005g/L，L-半胱氨酸0.4g/L，氯化血紅素0.005g/L，維生素K₃ 0.005g/L；

步驟二、培養益生菌至其達到對數生長期并收集，使用益生菌培養基洗滌收集的益生菌，再用益生菌培養基將益生菌菌液濃度稀釋至OD₆₀₀值為0.2～0.23；

步驟三、在96孔板中，每孔分別加入100μL稀釋后的益生菌菌液和100μL膳食纖維溶液，使最終每孔中菌體濃度為OD600為0.09～0.11；然后在37℃恒溫厭氧培養箱中培養72h，并記錄每12h的OD₆₀₀值；

步驟四、根據每個時間點記錄的擬桿菌的OD₆₀₀值，繪制擬桿菌在膳食纖維作用下的生長曲線。

5.根據權利要求4所述的一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法，其特征在于：步驟二中培養益生菌的具體步驟是：使用MRS培養基復蘇凍存于-80℃的益生菌直至其生長達到對數生長期。

6.根據權利要求5所述的一種檢測膳食纖維對人腸道菌活性影響的方法，其特征在于：所述益生菌包括長雙歧桿菌、鼠李糖乳桿菌和羅伊氏乳桿菌中的至少一種。