[發明專利]一種被靶向修飾且裝載有藥物的外泌體及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 202010426058.8
• 申請日: 2020-05-19
• 公開（公告）號: CN113679850B
• 公開（公告）日: 2023-05-19
• 發明（設計）人: 楊佳蕾;王擁軍;楊國棟;吳詩坡;侯利華
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京天壇醫院
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K47/54;A61K38/18;A61P25/00;A61P9/10;A61P7/04;A61P25/28;A61P25/14;A61P27/02;A61P25/16;A61P25/02;A61P7/10;A61P21/04;A61P21/00
• 代理公司: 北京悅和知識產權代理有限公司 11714
• 代理人: 司麗春

1.一種狂犬病病毒糖蛋白修飾的外泌體，其特征在于：所述外泌體內裝載有神經營養因子和編碼其的mRNA；

所述神經營養因子包括：神經生長因子、腦源性神經營養因子、神經營養因子4、神經營養因子5中的一種或幾種；

所述外泌體的制備方法包括以下步驟：采用狂犬病病毒糖蛋白與外泌體蛋白溶酶體相關膜糖蛋白2b融合表達的重組載體與克隆有神經營養因子的重組載體共同轉染表達系統的細胞，表達后收集細胞上清進行超速離心提取外泌體；

所述表達系統的細胞為人胚腎293細胞。

2.根據權利要求1所述的外泌體，其特征在于：裝載有神經營養因子和神經營養因子mRNA的狂犬病病毒糖蛋白修飾的外泌體為新鮮提取的或凍存的。

3.根據權利要求2所述的外泌體，其特征在于：當裝載有神經營養因子和神經營養因子mRNA的狂犬病病毒糖蛋白修飾的外泌體為凍存的時，凍存的溫度條件為-80℃，凍存的時間為3個月或以內。

4.根據權利要求1所述的外泌體，其特征在于：所述外泌體是靶向神經組織細胞；

和/或，所述外泌體能被神經元細胞、星形膠質細胞、小膠質細胞、少突膠質細胞及其他神經組織細胞攝取。

5.一種權利要求1至4任一所述的外泌體的制備方法，其特征在于：包括以下步驟：采用狂犬病病毒糖蛋白與外泌體蛋白溶酶體相關膜糖蛋白2b融合表達的重組載體與克隆有神經營養因子的重組載體共同轉染表達系統的細胞，表達后收集細胞上清進行超速離心提取外泌體。

6.根據權利要求5所述的制備方法，其特征在于：重組載體包括重組質粒，包含有狂犬病病毒糖蛋白與外泌體蛋白溶酶體相關膜糖蛋白2b融合表達的重組載體為pcDNA3.1(-)-RVG-Lamp2b重組載體；克隆有神經營養因子的重組載體為pCI-neo-NGF重組質粒。

7.根據權利要求6所述的制備方法，其特征在于：所述制備方法還包括以下步驟：將提取獲得的外泌體進行凍存。

8.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于：凍存的溫度條件為-80℃，凍存的時間為3個月或以內。

9.一種藥物組合物，其特征在于：包括權利要求1-4之一所述的外泌體，還包括一種或多種藥學上可接受的輔料。

10.根據權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于：所述藥物組合物為用于治療神經系統疾病的藥物組合物。

11.一種權利要求1-4之一所述的外泌體在制備治療神經系統疾病的藥物中的應用。

12.根據權利要求11所述的應用，其特征在于：所述神經系統疾病選自以下的一種或幾種：

腦血管性疾病；

神經系統變性疾病；

運動障礙性疾病；

神經系統脫髓鞘疾病；

脊髓疾病；

周圍神經疾病；

自主神經系統疾病；

神經肌肉接頭和肌肉疾病；

神經系統遺傳性疾病；

神經系統發育異常性疾病；

神經系統并發癥；

神經創傷性疾病。

13.根據權利要求11或12所述的應用，其特征在于：所述治療神經系統疾病包括以下方式的一種或幾種：抗炎、抗凋亡、促進神經細胞存活、促進神經再生。

14.根據權利要求11所述的應用，其特征在于：所述神經系統疾病選自以下的一種或幾種：

缺血性腦卒中、出血性腦卒中、腦小血管病、血管性認知障礙、運動神經元病、阿爾茲海默病、多系統萎縮、帕金森病、亨廷頓病、多發性硬化、視神經脊髓炎或腦白質營養不良、脊髓炎、脊髓損傷、面神經炎、多發性神經病、神經血管性水腫、雷諾病、重癥肌無力、肌營養不良、遺傳性共濟失調、腦性癱瘓、糖尿病神經系統并發癥、甲狀腺疾病神經系統并發癥、腦外傷或脊髓外傷。