[發(fā)明專利]一種被靶向修飾且裝載有藥物的外泌體及其制備方法和應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010426058.8
• 申請日: 2020-05-19
• 公開（公告）號: CN113679850B
• 公開（公告）日: 2023-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 楊佳蕾;王擁軍;楊國棟;吳詩坡;侯利華
• 申請（專利權(quán)）人: 首都醫(yī)科大學附屬北京天壇醫(yī)院
• 主分類號: A61K47/64
• 分類號: A61K47/64;A61K47/54;A61K38/18;A61P25/00;A61P9/10;A61P7/04;A61P25/28;A61P25/14;A61P27/02;A61P25/16;A61P25/02;A61P7/10;A61P21/04;A61P21/00
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• 代理人: 司麗春

本發(fā)明實施例涉及一種被靶向修飾且裝載有藥物的外泌體及其制備方法和應用。該外泌體裝載有選自以下的一種或幾種：神經(jīng)營養(yǎng)因子；具有神經(jīng)營養(yǎng)因子活性的神經(jīng)營養(yǎng)因子片段；具有神經(jīng)營養(yǎng)因子活性的短肽；及編碼其的mRNA，并可以靶向性地向神經(jīng)組織受體細胞遞送神經(jīng)營養(yǎng)因子，從而通過抗炎、抗凋亡、促進神經(jīng)細胞存活、促進神經(jīng)再生的方式減輕神經(jīng)組織損傷并促進修復。另外，該外泌體可以在?80℃的條件下穩(wěn)定地貯存3個月，并且其制備方法簡單。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種被靶向修飾且裝載有藥物的外泌體及其制備方法和應用。

背景技術(shù)

缺血性腦卒中、出血性腦卒中、阿爾茲海默癥、帕金森病等神經(jīng)系統(tǒng)疾病發(fā)病率在現(xiàn)代社會中越來越高，且治療比較困難。以急性缺血性腦卒中為例，經(jīng)FDA批準的藥物僅有rt-PA，但是其治療時間窗僅有4.5小時，導致只有少部分患者能從中獲益，所以亟待研發(fā)治療藥物。

神經(jīng)營養(yǎng)因子家族包括神經(jīng)生長因子(NGF)、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(BDNF)、神經(jīng)營養(yǎng)因子4(NT4)、神經(jīng)營養(yǎng)因子5(NT5)等。NGF是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族首個被發(fā)現(xiàn)的分子，在神經(jīng)系統(tǒng)生理發(fā)育過程中起關(guān)鍵調(diào)控作用。在神經(jīng)系統(tǒng)損傷后，神經(jīng)營養(yǎng)因子家族可以起到減輕組織損傷、促進組織修復的作用。例如，給予NGF可以減少神經(jīng)細胞死亡、調(diào)節(jié)炎癥并促進細胞向抗炎型極化、促進血管新生、促進神經(jīng)再生以及改善神經(jīng)功能，具有廣譜神經(jīng)保護作用。既往研究發(fā)現(xiàn)腦缺血損傷后，內(nèi)源性NGF的表達水平顯著下降。因此，如果能將神經(jīng)營養(yǎng)因子有效遞送至腦組織受體細胞，將可能對神經(jīng)系統(tǒng)疾病產(chǎn)生治療作用。

但目前將神經(jīng)營養(yǎng)因子遞送至神經(jīng)組織受體細胞存在以下問題：(1)常規(guī)靜脈注射或皮下注射的方法給予的神經(jīng)營養(yǎng)因子無法高效地穿過血腦屏障，雖然病毒載體、神經(jīng)營養(yǎng)因子基因修飾的細胞、納米膠囊和水凝膠等已經(jīng)被用作神經(jīng)營養(yǎng)因子的裝載手段。但目前沒有高效靶向神經(jīng)組織裝載神經(jīng)營養(yǎng)因子的遞送方式。(2)神經(jīng)營養(yǎng)因子的半衰期較短，例如經(jīng)靜脈外源性給予的NGF在體內(nèi)的半衰期只有2.3小時，皮下注射給予的NGF半衰期只有4.5h。(3)非特異性的遞送會引起外周組織的非預期不良效應，如采用肌肉注射NGF會引起局部疼痛。上述多種因素阻礙了NGF治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的應用。

即使采用靜脈注射或皮下注射直接遞送神經(jīng)營養(yǎng)因子的信使RNA(mRNA)，由于mRNA極度不穩(wěn)定、容易快速降解，導致無法通過直接遞送神經(jīng)營養(yǎng)因子的mRNA到達神經(jīng)組織并翻譯成神經(jīng)營養(yǎng)因子。

公開于該背景技術(shù)部分的信息僅僅旨在增加對本發(fā)明的總體背景的理解，而不應當被視為承認或以任何形式暗示該信息構(gòu)成已為本領(lǐng)域一般技術(shù)人員所公知的現(xiàn)有技術(shù)。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的

本發(fā)明的目的在于提供一種被靶向修飾且裝載有藥物的外泌體及其制備方法和應用，該外泌體中裝載有神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA等，可以靶向性地向神經(jīng)組織受體細胞遞送神經(jīng)營養(yǎng)因子，從而通過抗炎、抗凋亡、促進神經(jīng)細胞存活、促進神經(jīng)再生的方式減輕神經(jīng)組織損傷、促進修復。

解決方案

為實現(xiàn)本發(fā)明目的，本發(fā)明實施例提供了一種狂犬病病毒糖蛋白(RVG)修飾的外泌體，所述外泌體裝載有選自以下的一種或幾種：神經(jīng)營養(yǎng)因子；具有神經(jīng)營養(yǎng)因子活性的神經(jīng)營養(yǎng)因子片段；具有神經(jīng)營養(yǎng)因子活性的短肽；及編碼其的mRNA。

在一種可能的實現(xiàn)方式中，神經(jīng)營養(yǎng)因子包括：神經(jīng)生長因子、腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子、神經(jīng)營養(yǎng)因子4、神經(jīng)營養(yǎng)因子5、神經(jīng)營養(yǎng)因子6、神經(jīng)營養(yǎng)因子7中的一種或幾種。

在一種可能的實現(xiàn)方式中，裝載有神經(jīng)營養(yǎng)因子和/或神經(jīng)營養(yǎng)因子mRNA的狂犬病病毒糖蛋白(RVG)修飾的外泌體為新鮮提取的或凍存的。