本發明公開一種基于檢測試紙顯示的核酸檢測方法及核酸檢測試劑盒,所述方法包括步驟:提供一種核酸探針,所述核酸探針一端通過共價鍵與固相顆粒連接,另一端通過共價連接著抗體識別物;將擴增后的待測樣品以及所述核酸探針加入由crRNA以及Cas蛋白組成的反應體系中,反應得到反應液;將所述反應液滴加在檢測試紙的加樣區,所述加樣區含有膠體金標記的第一抗體,所述檢測試紙包括與所述第一抗體特異性結合的第二抗體位點,以及與所述抗體識別物結合的鏈霉親和素位點;通過觀察所述檢測試紙的顯色條帶判斷所述待測樣品中是否含有靶標核酸。本發明能有效回避此前核酸檢測出現的弱陽性與假陽性問題,從而有效提升檢測試紙顯色的核酸檢測方法的靈敏度與準確性。
技術領域
本發明涉及核酸檢測領域,特別涉及一種基于檢測試紙顯色的核酸檢測方法及核酸檢測試劑盒。
背景技術
核酸檢測是指針對生物樣本(如微生物、病毒、人、動物、植物等)中的遺傳物質DNA或RNA的堿基特性進行檢測的一類技術方法,比較常見的包括qPCR、LAMP以及RPA等。核酸檢測通常是用核酸擴增的方法將待測樣本的特定序列進行擴增并富集,再用特殊的方法對其進行標記,達到高靈敏度高特異性的檢測效果。相比于蛋白免疫技術,核酸檢測能夠精確地區分單個堿基的差別,可以用于病毒亞型的分型,在臨床上能更準確地鑒定出病原體、突變,對制定更精確的治療方案具有重要的參考意義。
近年來隨著CRISPR技術的發展,基于Cas蛋白附帶剪切活性而制備的相關檢測技術應運而生,兩端修飾的DNA或者RNA探針(一端為FAM或FITC修飾,另一端為biotin修飾)能在受到靶標核酸激活的Cas12或Cas13蛋白的剪切而在合適的條件下產生信號,該信號可以被檢測試紙進行顯色。
然而,由于檢測試紙原本并非設計為Cas12或Cas13核酸檢測,導致檢測試紙有以下缺陷:第一,無法有效區分弱陽性與陰性結果;第二,試劑中若無探針能產生與陽性一致的結果;而以上兩個缺陷能嚴重干擾到核酸檢測的靈敏性與準確性,也是Cas12與Cas13作為檢測技術無法有力推廣的關鍵原因。
因此,現有技術還有待于改進和發展。
發明內容
鑒于上述現有技術的不足,本發明的目的在于提供一種基于檢測試紙顯色的核酸檢測方法及核酸檢測系統,旨在解決現有基于檢測試紙顯色的核酸檢測方法靈敏度與準確性較差的問題。
本發明的技術方案如下:
一種基于檢測試紙顯色的核酸檢測方法,其中,包括步驟:
提供一種核酸探針,所述核酸探針一端通過共價鍵與固相顆粒連接,所述核酸探針另一端通過共價連接著抗體識別物;
將待測樣品進行擴增,將擴增后的待測樣品以及所述核酸探針加入由crRNA以及Cas蛋白組成的反應體系中,反應得到反應液;
將所述反應液滴加在檢測試紙的加樣區,所述檢測試紙的加樣區含有膠體金標記的第一抗體,所述檢測試紙包括與所述第一抗體特異性結合的第二抗體位點,以及與所述抗體識別物結合的鏈霉親和素位點;
通過觀察所述檢測試紙的顯色條帶判斷所述待測樣品中是否含有靶標核酸。
所述基于檢測試紙顯色的核酸檢測方法,其中,當所述核酸探針為DNA探針時,所述Cas蛋白為Cas12蛋白。
所述基于檢測試紙顯色的核酸檢測方法,其中,當所述核酸探針為RNA探針時,所述Cas蛋白為Cas13蛋白。
所述基于檢測試紙顯色的核酸檢測方法,其中,所述固相顆粒為磁珠、玻璃珠,塑料珠或瓊脂糖珠中的一種。
所述基于檢測試紙顯色的核酸檢測方法,其中,所述抗體識別物為生物素分子、FAM和FITC中的一種或多種。