[發明專利]用于檢測鼠源TCR轉基因拷貝數的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 202010423994.3
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN113684258A
• 公開（公告）日: 2021-11-23
• 發明（設計）人: 黃家琪;姚意弘;郭霖;閆佳旭;姚昕;朱恃貴;王飛;吳軍峰;陸吉順;任加強;張麗
• 申請（專利權）人: 上海賽比曼生物科技有限公司;無錫賽比曼生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;馬思敏

本發明提供了一種用于檢測鼠源TCR轉基因拷貝數的試劑盒及方法。本發明的發明人在鼠源TCR保守區設計了四對TaqMan引物進行了目的基因單獨反應測試，模擬真實人體樣本加入人背景DNA的目的基因單獨反應測試，和模擬真實人體樣本加入人背景DNA的目的基因和內參基因雙反應實驗測試，篩選出了效果較好且符合檢測標準的引物探針，其具有良好的線性關系、擴增效率和精密度，能夠快速、準確的檢測鼠源TCR轉基因拷貝數。

技術領域

本發明涉及基因組序列分析領域和生物信息學領域，具體涉及用于檢測鼠源TCR轉基因拷貝數的試劑盒及方法。

背景技術

TCR即T細胞抗原受體(T cell receptor，TCR):是T細胞特異性識別和結合抗原肽-MHC分子的分子結構，通常與CD3分子呈復合物形式存在于T細胞表面。大多數T細胞的TCR由α和β肽鏈組成，少數T細胞的TCR由γ和δ肽鏈組成。

用人腫瘤特異性抗原免疫轉有人源HLA基因的轉基因老鼠，可發現能識別人源腫瘤特異性抗原的高親和力鼠源TCR。這是目前篩選有治療價值的TCR的一種重要手段。

TCR-T的治療方法在實體瘤的治療中顯示出了廣闊的前景。但是出于對基因工程改造的細胞的生物安全性的考慮，FDA規定經基因工程改造的細胞中，轉基因拷貝數不能超過五個拷貝/細胞。這表明在TCR-T產品生產的質量監測和產品放行中需要快速，準確的檢測轉基因拷貝數。在TCR-T的動物試驗中，檢測動物樣本(組織或血液)中人源TCR基因的拷貝數可以反映出TCR-T在受試動物中擴增和增殖的情況；在TCR-T的臨床試驗中，檢測受試者樣本(組織或血液)中外源TCR基因的拷貝數可以反映出TCR-T在受試者中擴增和增殖的情況，作為TCR-T治療的關鍵的藥物動力學指標(PK)。

目前，針對TCR基因拷貝數的檢測尚無相關報道，因此，隨著鼠源TCR篩選的廣泛運用和臨床產品的開發，需要開發一種能夠快速，準確的檢測鼠源TCR轉基因拷貝數的方法。

發明內容

本發明的目的就是提供一種用于檢測鼠源TCR轉基因拷貝數的試劑，其能夠快速、準確的檢測鼠源TCR轉基因拷貝數。

本發明的第一方面，提供一種用于檢測鼠源TCR轉基因拷貝數的試劑盒，所述試劑盒包括針對鼠源TCR保守區域的引物對和Taqman探針，其中，所述的引物對選自下組：

(i)第一引物對(D1)：第一引物對包括序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物；

(ii)第二引物對(A1)：第二引物對包括序列如SEQ ID NO:4和SEQ ID NO:5所示的引物；和

(iii)第一引物對和第二引物對的組合。

在另一優選例中，所述的引物對為第一引物對，并且所述試劑盒還包括序列如SEQID NO:3所示的第一Taqman探針。

在另一優選例中，所述的引物對為第二引物對，并且所述試劑盒還包括序列如SEQID NO:6所示的第二Taqman探針。

在另一優選例中，所述的試劑盒還包括選自下組的引物對：

(iii)第三引物對(B1)：第三引物對包括序列如SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8所示的引物；和

(iv)第四引物對(C1)：第四引物對包括序列如SEQ ID NO:10和SEQ ID NO:11所示的引物。

在另一優選例，所述的引物對為第三引物對，并且所述試劑盒還包括序列如SEQID NO:9所示的第三Taqman探針。

在另一優選例，所述的引物對為第四引物對，并且所述試劑盒還包括序列如SEQID NO:12所示的第四Taqman探針。