[發明專利]一種川貝母肉質直根的培養方法

有效

• 申請號: 202010421501.2
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111492976B
• 公開（公告）日: 2022-09-13
• 發明（設計）人: 王躍華;馬濤;陳芳;張運春;王戰國;嚴鑄云;趙燦;郭陽陽;王盼;王銘愉;李含霜;楊巧蓮;黃驍;王帥
• 申請（專利權）人: 成都大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都科奧專利事務所(普通合伙) 51101
• 代理人: 余麗生

本發明公開了一種川貝母肉質直根的培養方法，該方法選取生長3年以上的川貝母鱗片葉作為外植體，經消毒處理后，接入鱗莖誘導培養基中培養得到鱗莖，再將鱗莖連同鱗莖盤一起接入肉質直根誘導培養基中培養得到叢生肉質直根，最后將肉質直根連同其基部組織接入肉質直根增殖培養基中培養得到總生物堿含量高的叢生肉質直根。本發明為川貝母有效成分的生產提供了一條新的途徑，可在一定程度上緩解川貝母資源短缺的問題。

技術領域

本發明涉及一種川貝母組織培養方法，具體是涉及一種川貝母肉質直根的培養方法。

背景技術

川貝母(Fritillaria cirrhosa D.Don)屬百合科植物，生長在海拔3500m～4500m的高度，主產于四川、西藏、云南等省區。川貝母喜冷涼氣候條件，具有耐寒、喜濕、怕高溫、喜蔭蔽的特性。氣溫達到30℃或地溫超過25℃，植株就會枯萎，在海拔低和氣溫高的地區不能生存。川貝母藥材具有清熱潤肺，化痰止咳之功效，用于肺熱燥咳，干咳少痰，陰虛勞嗽，咯痰帶血等癥狀；由于川貝母藥材價格昂貴，加之近年來無計劃盲目的采挖，自然資源日趨枯竭，預計在近幾十年內也難以緩解。組織培養技術具有生長周期短，繁殖率高，不受季節、氣候的影響，條件均一等優點，因此應用組織培養方法進行川貝母快速繁殖是解決川貝母藥材資源短缺問題的有效方法之一。

川貝母肉質直根含有大量的生物堿，利用組培技術培養川貝母肉質直根可獲得大量的生物堿。目前還未見有利用組培技術誘導培養川貝母肉質直根的報道。

發明內容

本發明的目的在于針對現有技術的不足而提供一種川貝母肉質直根的培養方法。

為達到上述目的，本發明采用的解決方案是：

一種川貝母肉質直根的培養方法，包括如下步驟：

(1)外植體的選取和消毒：選取生長3年以上的川貝母鱗片葉作為外植體，先用酒精擦洗干凈后陰干，然后進行消毒處理；

(2)川貝母組培鱗莖的誘導培養：將消毒后的川貝母鱗片葉接入鱗莖誘導培養基MS+氯吡苯脲0.1～0.5mg·L^-1+噻苯隆0.3～1.0mg·L^-1+NAA0.1～0.5mg·L^-1+瓊脂6～7g·L^-1中，在溫度為18～22℃、無光照的條件下進行鱗莖的誘導培養；

(3)肉質直根的誘導培養：選取直徑為0.4～0.6cm的鱗莖，連同基部的鱗莖盤一起接入1/4MS+KT0.5～1.5mg·L^-1+IBA0.3～0.5mg·L^-1+瓊脂6～7g·L^-1的肉質直根誘導培養基中，在培養溫度為24～28℃、無光照的條件下進行肉質直根的誘導培養；

(4)肉質直根的增殖培養：選取顏色為淡黃色、生長直徑為0.2～0.4cm的叢生肉質直根，將肉質直根沿縱向切成2～4條，但必須保留肉質直根的基部相連組織，使每條肉質直根的基部仍保持連接，然后接入改良MS+6-BA0.5～1.0mg·L^-1+KT1.0～2.0mg·L^-1+NAA0.3～0.5mg·L^-1+酵母多糖1.0～2.0g·L^-1的增殖培養基中，在培養溫度為12～20℃、每天光照2～4小時、光照強度為100～300lx、搖床轉速為40～80r/min的條件下進行肉質直根的增殖培養，所述改良MS的鹽酸硫胺素和甘氨酸的濃度均改為1.0mg/L；

上述所有培養基的pH值為5.8～6.2，蔗糖30～40g·L^-1。

進一步地，步驟(1)中川貝母鱗片葉先用濃度為40～50％的酒精擦洗干凈，然后再置于溫度為15～20℃的條件下陰干15～30min。