[發明專利]檢測水稻香味基因特定突變的專用引物及應用

有效

• 申請號: 202010421472.X
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111705151B
• 公開（公告）日: 2023-04-25
• 發明（設計）人: 曾躍輝;韋新宇;黃建鴻;張銳;尚偉;候新坡
• 申請（專利權）人: 三明市農業科學研究院
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 泉州市博一專利事務所(普通合伙) 35213
• 代理人: 方傳榜;呂森裕

1.一種用于水稻香味基因特定突變檢測的專用引物，該水稻香味基因特定突變為水稻Badh2基因編碼區第7外顯子處存在8-bp缺失和3個單核苷酸位點多態性突變，其特征在于：所述專用引物由FMbadh2-E7A-F和FMbadh2-E7A-R以及FMbadh2-E7B-F和FMbadh2-E7B-R構成，其中：

FMbadh2-E7A-F核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；

FMbadh2-E7A-R核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；

FMbadh2-E7B-F核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；

FMbadh2-E7B-R核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示。

2.一種檢測水稻香味基因特定突變的方法，該水稻香味基因特定突變為水稻Badh2基因編碼區第7外顯子處存在8-bp缺失和3個單核苷酸位點多態性突變，包括以下步驟：

Ⅰ.提取被檢測水稻的葉片基因組DNA；

Ⅱ.以步驟Ⅰ提取的葉片基因組DNA為模板，采用專用引物對水稻基因組進行PCR擴增，得到擴增產物；

Ⅲ.對步驟Ⅱ的擴增產物進行電泳分離檢測；

Ⅳ.依照步驟Ⅲ的檢測結果判定被檢測水稻是否為所述水稻香味基因特定突變的香型水稻；

其特征在于：所述步驟Ⅱ中的所述專用引物由FMbadh2-E7A-F和FMbadh2-E7A-R以及FMbadh2-E7B-F和FMbadh2-E7B-R構成，其中：

FMbadh2-E7A-F核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；

FMbadh2-E7A-R核苷酸序列如SEQ?ID?NO.2所示；

FMbadh2-E7B-F核苷酸序列如SEQ?ID?NO.3所示；

FMbadh2-E7B-R核苷酸序列如SEQ?ID?NO.4所示；

所述步驟Ⅲ中的所述電泳分離檢測為聚丙烯酰胺凝膠電泳分離檢測，電泳分離檢測的時間≤60min；

所述步驟Ⅳ中的判定結果為：

ⅰ.出現一條145-bp（FMbadh2-E7A）或是130-bp（FMbadh2-E7B）的特異性擴增條帶，判定被檢測水稻為含有該水稻香味基因特定突變的香型水稻；

ⅱ.出現一條153-bp（FMbadh2-E7A）或是138-bp（FMbadh2-E7B）的特異性擴增條帶，判定被檢測水稻為不含該水稻香味基因特定突變的香型水稻或者為無香味水稻品種；

ⅲ.出現同時含有145-bp和153-bp（FMbadh2-E7A）或是同時含有130-bp和138-bp（FMbadh2-E7B）兩條特異性擴增條帶，判定被檢測水稻為含有該水稻香味基因特定突變的雜合型水稻，表現為無香味。

3.根據權利要求2所述的一種檢測水稻香味基因特定突變的方法，其特征在于：所述步驟Ⅱ中的所述PCR擴增的反應體系為10μL體系，其包括：

ⅰ.5.0μL?2×F8?FastLong?PCR?MasterMix；

ⅱ.1.0μL的FMbadh2-E7A-F和FMbadh2-E7A-R等體積混合液或者FMbadh2-E7B-F和FMbadh2-E7B-R等體積混合液；

ⅲ.0.8μL?DNA模板；

ⅳ.3.2μL?ddH2O。

4.根據權利要求3所述的一種檢測水稻香味基因特定突變的方法，其特征在于：所述步驟Ⅱ中的所述PCR擴增的反應程序為：

ⅰ.94.0℃預變性3min；

ⅱ.94.0℃變性10s，55℃退火10s，72℃復性10s，進行35個循環；

ⅲ.72℃延伸5?min；

ⅳ.4℃保存。

5.根據權利要求2所述的一種檢測水稻香味基因特定突變的方法，其特征在于：所述步驟Ⅲ中的所述電泳分離檢測為8%的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳分離檢測，該檢測電壓為120V；所述步驟Ⅳ中的判定過程還包括采用核酸染料Ultra?GelRed染色。