[發明專利]一種基于多基因突變的肝癌早期檢測試劑盒

有效

• 申請號: 202010420516.7
• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111549134B
• 公開（公告）日: 2023-03-28
• 發明（設計）人: 邵麗芳;余曉波;曾麗;賈俊玲
• 申請（專利權）人: 浙江大學醫學院附屬第一醫院;浙江默樂生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6858;C12N15/11
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 崔自京

本發明公開了一種基于多基因突變的肝癌早期檢測試劑盒，屬于基因檢測技術領域。本發明公開的一種基于多基因突變的肝癌早期檢測試劑盒，開發了基于熒光PCR反應技術的多基因突變檢測的肝癌篩查試劑盒，用于輔助臨床對于肝癌的早期篩查；檢測方便且靈敏度高。

技術領域

本發明涉及基因檢測技術領域，更具體的說是涉及一種基于多基因突變的肝癌早期檢測試劑盒。

背景技術

肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一。全球有85％的肝癌發病集中在資源貧乏或發展中國家與地區。我國是肝癌的主要高發區，因其起病隱匿，病程短，預后差，不僅嚴重影響公眾健康，也對我國的社會經濟發展造成了嚴重負擔。我國每年約有38.3萬人死于肝癌，占全球肝癌死亡病例數的51％，嚴峻的形勢給我國的社會和醫療帶來了沉重的負擔。由于多數患者在無明顯癥狀時，對疾病重視程度不足，缺乏定期檢查意識。此外，中低下收入肝病人群不愿承受醫院檢測費用，或由于“看病難”等原因不愿進行定期檢查，往往錯過了早期診斷的最佳時間，以致肝癌的發現多為晚期，僅30％的患者有手術切除機會，切除后5年內轉移、復發率高達60％～70％。因此，實現早期篩查與診斷對于肝癌的有效治療和改善預后尤為重要。

近年來，更多研究證據顯示，人體正常的基因突變累積會誘發癌癥患病風險，導致如癌基因激活以及抑癌基因失活、丟失等情況發生。RAS基因作為細胞內信號傳導蛋白類的原癌基因，屬于膜結合型GTP/GDP相關結合蛋白，為EGFR信號通路內重要癌基因，在細胞增殖、血管生成等有關信號通路內起到重要調控作用，能視作分子開關參與細胞外增殖及生長、分化等相關信號傳遞至細胞內過程。研究顯示，RAS基因家族和人類的腫瘤發生存在相關性的常見特征性基因為KRAS、HRAS及NRAS，在RAS基因出現突變情況下能引起RAS異?；罨瑢毎某掷m生長、分化進行刺激，引發腫瘤。有研究顯示肝癌患者的KRAS基因出現顯著突變，同時肝癌伴肝外轉移者的KRAS基因突變率顯著增加。

P53有野生型(p53-wt)和突變型(p53-mt)。p53-wt是人類重要的腫瘤抑制基因，在正常情況下，其功能是調節細胞周期中DNA修復、合成及細胞程序性死亡，抑制腫瘤細胞的形成，起著“分子警察”的作用。當p53基因發生丟失或突變時，改變原有的功能引起細胞生長的失控及轉錄即為p53-mt。p53-mt不僅引起53抑癌活性的喪失，而且具有促進惡性轉化的活性。幾乎半數以上的惡性腫瘤當中均可檢測到p53基因的突變。

BCL10是一種含有胱冬肽募集結構域的細胞凋亡調節因子，是從粘膜相關淋巴組織淋巴瘤的染色體轉位中發現的。Bcl10基因的突變或過表達與淋巴瘤的發生發展密切相關。在多種實體瘤如卵巢癌、頭頸鱗狀細胞癌、肝細胞肝癌、宮頸癌、乳癌、腎透明細胞癌中研究發現，Bcl10廣泛參與癌細胞的侵襲浸潤，促進癌細胞生長。

CTNNB1(β-catenin1)是編碼β連環蛋白的基因，CTNNB1基因編碼的蛋白質是一個復雜的蛋白質，構成粘合連接處并且維持上皮細胞層通過調節細胞生長和細胞之間的粘附。日本的一項報道顯示CTNNB1基因外顯子3突變，是導致Wnt\β連環蛋白通路失活的重要分子機制，與肝癌的發生高度相關，突變率為35％。

AT豐富結構域1A(ARIDlA)基因是SWI/SNF染色體重塑復合物當中的重要成員，定位于人類1號染色體1p36.11，其編碼蛋白質由2285個氨基酸殘基構成，相對分子量約為240×10³。研究已經證實，染色質重塑異常導致基因表達紊亂可以引發多種疾病。亦有報道ARIDlA基因突變導致蛋白的表達量降低，引發卵巢癌、子宮內膜癌、胃癌、肝癌、膀胱癌等多種惡性腫瘤。

端粒酶逆轉錄酶(telomerase reverse transcriptase，TERT)是端粒酶活性的關鍵決定者。TERT基因位于染色體5P15.33，正常體細胞攜帶2倍復制的TERT基因。TERT表達對細胞永生化和腫瘤進展起著十分重要的作用，TERT復制増加會導致腫瘤的發生。近年來研究發現，在多種腫瘤中TERT啟動子突變在激活端粒酶過程中發揮著重要作用，TERT啟動子突變可以上調端粒酶活性，影響腫瘤的發生發展。