[發(fā)明專利]一株降解塑料地膜的克雷伯氏菌及其應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2020-05-18
• 公開（公告）號: CN111593000B
• 公開（公告）日: 2022-07-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林雁冰;劉佳茜;侯麗君;劉婷婷;王沛媛
• 申請（專利權(quán)）人: 西北農(nóng)林科技大學(xué)
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C08J11/10;C12R1/22;C08L23/06;C08L67/02
• 代理公司: 西安佩騰特知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 61226
• 代理人: 姚敏杰

1.一株降解塑料地膜的肺炎克雷伯氏菌，其特征在于：為肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）N3-2，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號CCTCC NO: M 20191054；保藏時間是2019年12月16日。

2.一種如權(quán)利要求1所述的一株降解塑料地膜的肺炎克雷伯氏菌在降解聚乙烯塑料地膜中的應(yīng)用。

3.一種如權(quán)利要求1所述的一株降解塑料地膜的肺炎克雷伯氏菌在降解PBAT塑料地膜中的應(yīng)用。

4.一種基于權(quán)利要求1所述的一株降解塑料地膜的肺炎克雷伯氏菌降解聚乙烯塑料地膜的方法，其特征在于：所述方法包括：

1）將聚乙烯塑料地膜剪成膜片，進(jìn)行無菌處理；

1.1）用2%SDS溶液將膜片浸泡，浸泡時間不低于4小時，浸泡期間超聲30 min；

1.2）用30%雙氧水將步驟1.1）超聲后的膜片浸泡10 min；

1.3）依次用75%乙醇和95%乙醇，將步驟1.2）的膜片浸泡，浸泡時間不低于4小時，浸泡期間超聲30 min；

2）將權(quán)利要求1所述的一株降解塑料地膜的肺炎克雷伯氏菌接種至LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期，轉(zhuǎn)入離心管離心，去掉上清，將沉淀菌體用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖溶液洗滌；

3）將30 mL無機(jī)鹽培養(yǎng)基和步驟2）的沉淀菌體混合，重懸并調(diào)節(jié)菌液濃度，保持菌液的OD₆₀₀值為0.8~1.0；

4）向步驟3）的OD₆₀₀值為0.8~1.0的菌液中加入步驟1）無菌處理后的聚乙烯塑料地膜膜片，放置于恒溫震蕩培養(yǎng)箱中28℃、180 rpm培養(yǎng)8周。

5.一種基于權(quán)利要求1所述的一株降解塑料地膜的肺炎克雷伯氏菌降解PBAT塑料地膜的方法，其特征在于：所述方法包括：

1）將PBAT塑料地膜剪成膜片，進(jìn)行無菌處理；

1.1）用2%SDS溶液將膜片浸泡，浸泡時間不低于4小時，浸泡期間超聲30 min；

1.2）用30%雙氧水將步驟1.1）超聲后的膜片浸泡10 min；

1.3）依次用75%乙醇和95%乙醇，將步驟1.2）的膜片浸泡，浸泡時間不低于4小時，浸泡期間超聲30 min；

2）將權(quán)利要求1所述的一株降解塑料地膜的肺炎克雷伯氏菌接種至LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)至對數(shù)生長期，轉(zhuǎn)入離心管離心，去掉上清，將沉淀菌體用0.01 mol/L磷酸鹽緩沖溶液洗滌；

3）將30 mL無機(jī)鹽培養(yǎng)基和步驟2）的沉淀菌體混合，重懸并調(diào)節(jié)菌液濃度，保持菌液的OD₆₀₀值為0.8~1.0；

4）向步驟3）的OD₆₀₀值為0.8~1.0的菌液中加入步驟1）無菌處理后的PBAT塑料地膜膜片，放置于恒溫震蕩培養(yǎng)箱中28℃、180 rpm培養(yǎng)8周。