[發(fā)明專利]用于深海微生物原位細(xì)胞裂解的組合物、試劑、試劑盒及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010418723.9
• 申請(qǐng)日: 2020-05-18
• 公開（公告）號(hào): CN111534509B
• 公開（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李文莉;王勇;位站飛;李俊;高兆明;賀麗生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院深?？茖W(xué)與工程研究所
• 主分類號(hào): C12N15/10
• 分類號(hào): C12N15/10;C12Q1/6806
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

本發(fā)明涉及深海微生物領(lǐng)域，特別涉及深海原位細(xì)胞裂解組合物、裂解液、試劑盒及其應(yīng)用。該方法可以在深海低溫高壓條件下直接獲取海水中微生物的核酸。首先通過裝置的海水泵將大量海水過濾到濾膜腔中，完成海水中微生物的富集；再通過蠕動(dòng)泵將裂解液注入到濾膜腔，通過化學(xué)裂解方式破壞蛋白從而釋放核酸；最后使用核酸吸附柱對(duì)核酸進(jìn)行回收和保存；同時(shí)依靠深海核酸提取裝置，可以一次獲得多達(dá)9組的深海海水中微生物的核酸樣品。本發(fā)明的技術(shù)方案中使用的裂解液與商業(yè)常溫裂解液具有等同效用，且可以有效的避免傳統(tǒng)采樣方式中由于溫度、壓力等變化對(duì)核酸的影響。目前該技術(shù)方法已經(jīng)成功用于全海深微生物核酸原位提取裝置，獲得微克級(jí)的核酸量。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及深海微生物領(lǐng)域，特別涉及深海原位細(xì)胞裂解組合物、裂解液、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

深海生物在整個(gè)海洋甚至全球的生態(tài)系統(tǒng)中扮演著重要角色。采集不同深度海水中的生物樣品，是現(xiàn)代海洋學(xué)研究的重要內(nèi)容。隨著各種海洋科學(xué)研究與海洋資源開發(fā)利用的不斷深入，如何快速、方便和有效地對(duì)海洋生物進(jìn)行調(diào)查采樣，以獲得第一手的海洋生物科學(xué)研究樣品，全面了解特定海域的生物資源情況，成為了當(dāng)務(wù)之急。和傳統(tǒng)的采樣分析相比，近年發(fā)展起來的深海原位細(xì)胞富集采樣是最有效的深海生物核酸獲取手段，是對(duì)傳統(tǒng)海洋生物學(xué)研究方法的一次重大突破。

深海高壓低溫，如何在原位環(huán)境中使深海生物細(xì)胞裂解并提取核酸是深海微生物研究的難題。尤其是原位獲得的高質(zhì)量RNA是研究深海生物基因功能的前提。深海核酸提取儀采用泵連接過濾腔(內(nèi)含生物濾膜)的方式對(duì)海水大通量過濾。當(dāng)過濾足量的海水體積后，觸發(fā)轉(zhuǎn)換閥切換管路，使泵的入口由海水切換為細(xì)胞裂解液，通過置換管路內(nèi)原有的海水實(shí)現(xiàn)過濾腔內(nèi)微生物和幼蟲的細(xì)胞支撐蛋白裂解。收集的核酸可以用于高通量測(cè)序來研究深海生物的宏基因組和轉(zhuǎn)錄組。因此，深海原位富集細(xì)胞裂解液對(duì)于原位獲得深海生物核酸具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供了用于深海微生物原位細(xì)胞裂解的組合物、試劑、試劑盒及應(yīng)用。該方法可以在深海低溫高壓條件下直接獲取海水中微生物的核酸。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了用于深海微生物原位細(xì)胞裂解的組合物，包括：Tris-HCl 25～50mM、NaCl 100～200mM、EDTA 1～10mM、Triton X-100 1～2％(v/v)、溶菌酶3～5mg/ml、SDS0.05～0.1％(v/v)、蛋白酶K10～20μl/ml。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，組合物包括：Tris-HCl 50mM、NaCl 150mM、EDTA1mM、Triton X-100 1％(v/v)、溶菌酶3mg/ml、SDS 0.05％、蛋白酶K 20μl/ml。

在上述研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還提供了所述的組合物在制備深海微生物原位細(xì)胞裂解的試劑和/或試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了所述的組合物在制備深海微生物原位核酸提取的試劑和/或試劑盒中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了所述的組合物在制備深海微生物核酸檢測(cè)的試劑和/或試劑盒中的應(yīng)用。

在上述研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還提供了深海微生物原位細(xì)胞裂解的試劑或試劑盒，包括所述的組合物以及可接受的助劑。

在上述研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還提供了深海微生物原位核酸提取的試劑或試劑盒，包括所述的組合物以及可接受的助劑。

在上述研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還提供了深海微生物核酸檢測(cè)的試劑或試劑盒，包括所述的組合物以及可接受的助劑。

在上述研究的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還提供了深海微生物原位細(xì)胞裂解的方法，采用所述的組合物或所述的深海微生物原位細(xì)胞裂解的試劑或試劑盒。