[發(fā)明專利]用于深海微生物原位細胞裂解的組合物、試劑、試劑盒及應(yīng)用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010418723.9 | 申請日： | 2020-05-18 |
| 公開（公告）號： | CN111534509B | 公開（公告）日： | 2022-05-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 李文莉;王勇;位站飛;李俊;高兆明;賀麗生 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學院深海科學與工程研究所 |
| 主分類號： | C12N15/10 | 分類號： | C12N15/10;C12Q1/6806 |
| 代理公司： | 北京集佳知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227 | 代理人： | 潘穎 |
| 地址： | 572000 *** | 國省代碼： | 海南;46 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 用于 深海 微生物 原位 細胞 裂解 組合 試劑 試劑盒 應(yīng)用 | ||
【權(quán)利要求書】：
1.深海微生物原位核酸提取方法，其特征在于，提取過程分為三個步驟：微生物富集、細胞裂解和核酸回收；
(1)微生物富集：使用海水泵將海水注入已經(jīng)安裝有濾膜的濾膜腔，富集微生物于濾膜上；
(2)細胞裂解：針對深海高壓低溫的條件，采用如下配方的細胞裂解液：
Tris-HCl 50mM、NaCl 150mM、EDTA 1mM、TritonX-100 1％(v/v)、溶菌酶3mg/ml、SDS0.05％、蛋白酶K 20μl/ml；
微生物富集完成后，通過閥門的切換，將海水泵管路切換為裂解液注入蠕動泵；向濾膜腔中注入裂解液置換濾膜腔內(nèi)海水，并靜置裂解細胞；裂解完成后，同時打開裂解液注入蠕動泵和裝置后端的乙醇注入蠕動泵，混合后的液體用于后續(xù)核酸回收；
(3)核酸回收：核酸回收方式選擇使用吸附柱進行回收，將吸附在吸附柱上的核酸保存在裂解液和乙醇的混合液中。
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