[發明專利]用于產生睫狀邊緣帶樣結構的方法

在審

• 申請號: 202010418301.1
• 申請日: 2013-06-07
• 公開（公告）號: CN111607557A
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發明（設計）人: 中野德重;安藤覺;笹井芳樹;永樂元次
• 申請（專利權）人: 住友化學株式會社;國立研究開發法人理化學研究所
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李唐

本發明涉及用于產生睫狀邊緣帶樣結構的方法。提供用于產生包含睫狀邊緣帶樣結構的細胞聚集體的方法等，所述方法的特征在于包括在含有Wnt信號傳遞途徑激動劑的無血清培養基或血清培養基中，將包含視網膜組織的細胞聚集體僅培養一段時間直至出現表達RPE65基因的細胞，并隨后在不含有Wnt信號傳遞途徑激動劑的無血清培養基或血清培養基中培養“其中不出現表達RPE65基因的細胞的細胞聚集體”的步驟，在所述視網膜組織中Chx10陽性細胞以20%或更高的比例存在。根據本發明，可以高效產生睫狀邊緣帶樣結構。

本申請是申請日為2013年6月7日的中國專利申請201380041868.X“用于產生睫狀邊緣帶樣結構的方法”的分案申請。

技術領域

本發明涉及用于產生睫狀邊緣帶樣結構的方法等。

背景技術

已知體內視網膜的睫狀邊緣帶為結構形成和視網膜組織維持執行重要功能（參見例如，非專利文件1），并且例如，已知Rdh10基因（非專利文件2）和Otx1基因（非專利文件1）是睫狀邊緣帶的基因標志物。然而，沒有已知的用于從多能干細胞高效產生該睫狀邊緣帶樣結構的方法。

[文件列表]

[非專利文件]

專利文件1：W. Zac Stephens, Megan Senecal, Minhtu Nguyen,和TatjanaPiotrowski (2010) Loss of adenomatous polyposis coli (apc) Results in anExpanded Ciliary Marginal Zone in the Zebrafish Eye. DEVELOPMENTAL DYNAMICS卷:239, 頁:2066-2077

專利文件2：Fumi Kubo和Shinichi Nakagawa (2009) Hairy1 acts as a nodedownstream of Wnt signaling to maintain retinal stem cell-like progenitorcells in the chick ciliary marginal zone. Development 卷:136, 頁:1823-1833。

發明內容

本發明待解決的問題

已存在開發用于高效產生睫狀邊緣帶樣結構的方法的期望。

解決問題的方法

考慮到該情形，本發明人已經進行了深入研究并實現本發明。

尤其是，本發明提供：

1. 用于產生包含睫狀邊緣帶樣結構的細胞聚集體的方法，其包括在各自含有作用于Wnt信號途徑的物質的無血清培養基或含血清培養基中，將包含視網膜組織的細胞聚集體僅在出現表達RPE65基因的細胞之前培養一段時間，隨后在各自不含有作用于Wnt信號途徑的物質的無血清培養基或含血清培養基中培養因此獲得的“其中不出現表達RPE65基因的細胞的細胞聚集體”的步驟，在所述視網膜組織中Chx10陽性細胞以所述組織的20%或更高的比例存在（在下文中，有時候稱為本發明的產生方法）；

2. 上述項目1的產生方法，其中出現表達RPE65基因的細胞之前的一段時間是這樣的一段時間，在所述時間內Chx10陽性細胞以組織的50%-1%的比例存在于視網膜組織中，并且其中不出現表達RPE65基因的細胞的細胞聚集體是其中Chx10陽性細胞以組織的50%-1%的比例存在于視網膜組織中的細胞聚集體；

3. 上述項目2的產生方法，其中在各自不含有作用于Wnt信號途徑的物質的無血清培養基或含血清培養基中培養因此獲得的“其中不出現表達RPE65基因的細胞的細胞聚集體”，直至視網膜組織中存在的Chx10陽性細胞的比例達到所述組織的50%或更高；